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蒂科（上海）生物科技有限公司

細(xì)胞傳代培養(yǎng)小技巧

時(shí)間：2022-1-17閱讀：1242
1.細(xì)胞生長(zhǎng)至高密度時(shí)，即須分至新的培養(yǎng)瓶中，一般稀釋比例為1:3至1:6，依細(xì)胞種類而異。
2.材料：
2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶)： 以10ml分裝于15ml無(wú)菌離心管中，保存于?20℃，使用前放在37℃ 水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生
3.步驟：
3.1.附著型細(xì)胞(adherentcell)
3.1.1.吸掉舊培養(yǎng)液。
3.1.2.用D-PBS洗滌細(xì)胞一至二次。
3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時(shí)，吸掉或者傾倒胰酶溶液。(若沒(méi)有*去除，則在胰酶作用后，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用)
3.1.4.輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
3.2.懸浮型細(xì)胞(suspensioncell)
3.2.1.吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5-10分鐘。
3.2.2.吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
3.3.雜交瘤細(xì)胞
有些雜交瘤需培養(yǎng)三天以上才會(huì)產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基，則可能會(huì)失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分至新培養(yǎng)瓶中。

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