| 上海力陽實業(yè)有限公司 |
10
13501729246
當(dāng)前位置：首頁>>技術(shù)中心>>技術(shù)文章>>熒光顯微鏡的應(yīng)用要點須知
在線溝通：
范駿 （經(jīng)理）
- 電話：
- 86-021-53930273
- 手機：
- 13501729246
- 傳真：
- 86-021-53930259
- 聯(lián)系我時，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://m.duoo135.com/st342147/
- 公司網(wǎng)站：
- www.liyangco.com
熒光顯微鏡的應(yīng)用要點須知
閱讀：1211發(fā)布時間：2021-12-4
1)熒光顯微鏡預(yù)檢查和調(diào)節(jié)
(1)每次進(jìn)行熒光觀測前，必須例行檢查熒光裝置的燈絲對中、光路對焦、孔徑光闌、視場光闌設(shè)置等狀況。
(2)所需要的熒光激發(fā)/發(fā)射濾光片組件是否已裝在轉(zhuǎn)換器中，物鏡配置是否得當(dāng)，除去物鏡前透鏡的油漬和灰塵。
(3)如同時進(jìn)行透射光相差觀察，要檢查聚光鏡對中心及相差環(huán)與物鏡相反的共軛情況。
(4)檢查樣品載體(載玻片、蓋玻片和其他器皿)有否掛有液體、灰塵，厚度是否在物鏡標(biāo)定的工作距離范圍內(nèi)。切片樣品不能太厚，約≤10μm為宜。
(5)因照明光源含有紫外線，在載物臺前上方放一塊棕色遮光板，以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。
(6)電壓不穩(wěn)會降低高壓汞燈的使用壽命，光源電源最好加配穩(wěn)壓器。
(7)為延長汞燈壽命，在開啟后15min方可關(guān)閉；汞燈熒光電源一旦關(guān)閉，再次啟動至少需等待10min，以使水銀蒸汽冷卻復(fù)至原態(tài)，否則會影響燈的壽命。
2)熒光鏡像觀察
(1)在開啟熒光燈源后約5～10min激發(fā)光強度趨于穩(wěn)定，裝載樣品進(jìn)行觀察；為防止在調(diào)焦和尋找物像過程中過度激發(fā)光照會造成樣品熒光淬滅，最好先通過縮小熒光照明器的孔徑光闌或加ND濾光片將激發(fā)光調(diào)節(jié)到適度強度，有規(guī)律地移動樣品臺，待確定鏡像后，在調(diào)節(jié)到最佳熒光狀態(tài)用于拍攝記錄。
(2)鏡像質(zhì)量不佳的調(diào)整。排除樣品制備因素外，可進(jìn)行的必要調(diào)節(jié)措施是：
?、倥懦上窆饴分械恼诠饣蛳薰馄骷?，如DIC附件、ND濾光片等。
?、谥匦抡{(diào)節(jié)熒光照明器的收光器對焦和孔徑光闌大小。
?、奂?xì)心調(diào)節(jié)物鏡覆蓋差校正環(huán)。
?、軓?fù)查熒光激發(fā)/發(fā)射組件是否與所標(biāo)記的熒光色素對應(yīng)。
(3)在不影響分辨率的前提下，于照相取景框和CCD靶面范圍之外，可盡量回縮熒光光路視場光闌和物鏡(100X物鏡)的數(shù)值孔徑光闌調(diào)節(jié)環(huán)，以避免雜散光的影響、提高景深，并可減小激發(fā)面積防止附加樣品淬滅。
(4)暫時不觀察時，應(yīng)阻斷激發(fā)光路。
(5)油鏡觀察時，須用“無熒光油”，尤其是在U、V激發(fā)時，因常規(guī)鏡檢用的香柏油帶有青色熒光。
3)熒光顯微鏡的熒光照相和數(shù)字CCD相機圖像采集
(1)熒光照相
?、俦M管肉眼觀察熒光鏡像亮度與普通明場相差無幾，而實際上曝光時間要增加數(shù)倍甚至幾十倍，應(yīng)使用快速感光膠片，如ISO200(24DIN)、ISO400(27DIN)。
?、诟鶕?jù)熒光物像在測光區(qū)的分布比例和鏡像的明暗程度設(shè)置曝光補償調(diào)節(jié)，原則上適當(dāng)增補償，以獲得背景黑暗熒光圖像明亮、鮮艷的照片效果。
?、廴绻麤]有照明標(biāo)線取景器，可先選擇較明亮的熒光區(qū)域進(jìn)行對焦調(diào)整。
?、軐c狀熒光物像或撲捉某點為主的拍攝，可選擇適當(dāng)?shù)狞c測光模式。
?、輰υ谕环枰瑯訔l件拍攝的分散點狀熒光物像，可試用點測光配合自動鎖定方式拍攝。
?、奁毓膺^程應(yīng)避免任何振動，有條件可配置防震臺。
(2)數(shù)字CCD相機圖像采集
?、俟鈱W(xué)接口的中間倍率要與CCD的芯片尺寸合理匹配。
?、诓捎煤线m的熒光拍攝模式，摸索減背景(Background Subtraction)處理條件，根據(jù)鏡像情況設(shè)置Binning、Gain、Gamma等參數(shù)。
?、垡駽CD芯片靈敏度較高，如果熒光鏡像過于明亮，為獲取對比度較好的采集圖像，可適當(dāng)縮小熒光照明器孔徑光闌或加ND濾光片，特別是在熒光輝光較強影響拍攝樣品細(xì)節(jié)的情況時。
實際工作中，為獲得較好的熒光圖像拍攝質(zhì)量需要對上述調(diào)節(jié)機制的綜合運用，反復(fù)摸索、優(yōu)化條件。
上海力陽實業(yè)有限公司主營產(chǎn)品：OLYMPUS熒光顯微鏡,液晶檢查顯微鏡,超景深顯微鏡
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://m.duoo135.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。