腫瘤細胞使用瞬時轉染來蛋白瞬時轉染表達蛋白  以往為了獲得蛋白質的高表達產量，必須先轉染細胞，然后挑選一個穩(wěn)定的轉染細胞系進行蛋白的擴增和富集。而挑選這樣一個細胞系往往需要花費數(shù)周甚至數(shù)月的時間，這既可能是由于試劑的細胞毒性也可能是由于轉染的低效率。如果是因為轉染試劑具有細胞毒性，那么只有少數(shù)細胞能夠存活，從而導致蛋白質的產量很低。而如果是因為轉染成功的細胞太少，那么那些未轉染的細胞生長速度大大超過轉染成功的細胞，其結果同樣也只能產生少量的目標蛋白。使用一種溫和的可以轉染大多數(shù)細胞的轉染試劑，就可獲得蛋白質的高表達。

現(xiàn)將一些影響蛋白表達的關鍵因素分列如下： 細胞系(有些類型的細胞比其他細胞產量高) 質粒骨架(例如：增強子，啟動子，轉錄調控元件) 目的蛋白(有些蛋白很難獲得高表達量) 目的蛋白的cDNA序列(例如：密碼子的優(yōu)化) 培養(yǎng)條件(營養(yǎng)物，代謝廢物，轉染抑制物)  當這些因素都得到優(yōu)化，并加入合適配比和數(shù)量的轉染復合物(轉染試劑-質粒)后，就可獲得至少達到平均表達水平的穩(wěn)定表達克隆。

腫瘤細胞瞬時轉染和穩(wěn)定轉染  制備一種穩(wěn)定細胞系的*步是選擇一種同時含有選擇性標記物和目的基因的載體。選擇性標記物通常是可以產生一種蛋白質或者酶來幫助細胞在某些毒性物質存在下存活的基因。一旦選好了質粒載體，無論瞬時或者穩(wěn)定表達都采用一樣的轉染方法。在加入選擇性試劑之前，被轉染的細胞至少要在標準培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。這樣就使細胞有時間表達足量的蛋白使之能夠耐受選擇性試劑的作用。細胞于是在加有選擇性試劑的培養(yǎng)基中生長。那些未成功轉染質粒的細胞即被殺死。而只有那些成功轉染的細胞能夠生長。有的時候，還可以將選擇性試劑持續(xù)加入到培養(yǎng)基中，以維持對細胞的選擇壓力。 
 胞漿型磷脂酶A2IgG    小鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)
 胞質接頭蛋白Keap1IgG    小鼠促卵泡素(FSH)
 胞質緊密粘連蛋白1IgG    小鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)
 苯乙醇胺甲基轉移酶IgG    小鼠促甲狀腺素(TSH)
 鼻咽癌細胞相關基因6IgG    小鼠促黃體激素(LH)
 臂板蛋白3AIgG    小鼠雌三醇(E3)
 臂板蛋白3FIgG    小鼠雌激素(E)
 臂板蛋白4CIgG    小鼠雌二醇受體(ER)
 標記胰島素IgG    小鼠雌二醇(E2)
腫瘤細胞