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細(xì)胞株凍存技術(shù)

時間:2018/7/3閱讀:386
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細(xì)胞株實驗室低溫保存設(shè)備包括:液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱(-20℃、-30℃、-40℃)、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。

檢驗冰箱可靠性和制冷能力的方法:1、常規(guī)冰箱放置溫度計;2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復(fù)開門
很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑,它們既可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用,例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有準(zhǔn)則,但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜(DMSO)和甘油是保護(hù)活細(xì)胞和組織使用zui廣泛且zui有效的凍存保護(hù)劑。其他凍存保護(hù)劑可根據(jù)情況使用,可單獨(dú)使用也可聯(lián)合使用,包括:聚乙烯乙二醇(polyethylene glycol),丙烯乙二醇(propylene  glycol),甘油(glycerine),聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrolidone),山梨醇(sorbitol),右旋糖苷(dextran),海藻糖(trehalose)。

凍存組織和整個器官的需求,促進(jìn)了凍存方法的發(fā)展,新方法也提高了凍存細(xì)胞和有機(jī)體的復(fù)蘇。這些方法包括改變凍存保護(hù)劑的濃度和加入添加劑,避免凍存過程引發(fā)的細(xì)胞調(diào)亡或 程序性死亡。多年來人們一直認(rèn)為,是凍存過程中產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)物理變化或損壞,造成凍存后細(xì)胞的死亡。而zui近有研究發(fā)現(xiàn),一些更為精細(xì)的胞內(nèi)活動可能導(dǎo)致了細(xì)胞死亡,而這些活動可在一定程度上受控于適當(dāng)?shù)膬龃嫣砑觿?/p>

凍存過程中,凍存保護(hù)劑有多種功能。例如,DMSO 可以降低冰點(diǎn),促進(jìn)細(xì)胞在胞內(nèi)冰晶形成之前脫水更加*。普遍認(rèn)為,當(dāng)凍存保護(hù)劑可有效穿透細(xì)胞,延遲胞內(nèi)冰晶形成,降低溶液效應(yīng)時,凍存保護(hù)的效果*。另外,需要根據(jù)凍存的細(xì)胞類型來選擇凍存保護(hù)劑。對絕大多數(shù)細(xì)胞來說,甘油是更好的選擇,因為它的毒性比DMSO 小。但是,DMSO 具有更好的滲透性, 通常作為較大型較復(fù)雜的細(xì)胞凍存,如原生生物。在添加到細(xì)胞株懸液之前,凍存保護(hù)劑應(yīng)該用新鮮培養(yǎng)基稀釋到適宜濃度,這能zui小化潛在的化學(xué)反應(yīng)損害,并確保細(xì)胞能均一接觸到保護(hù)劑,減少毒害效應(yīng)。DMSO 和甘油通常使用的濃度范圍為 5-10%(v/ v)。除了用于植物細(xì)胞,二者一般不聯(lián)合使用。

 鋅指蛋白474IgG 大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )

 鋅指脂蛋白-1aIgG 大鼠黑色素(MC Ab)

 鋅指脂蛋白-1bIgG 大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα) 

 鋅指脂蛋白-1cIgG 大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)

 鋅指脂蛋白217IgG 大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)

 鋅指轉(zhuǎn)錄因子SlugIgG 大鼠核因子κB(NF-κB)

 新的飽食分子蛋白IgG 大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)

 新朊蛋白/朊蛋白相關(guān)蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白IgG 大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)

 新型血管活性因子UCN(人)IgG 大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)
細(xì)胞株

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