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Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法

時(shí)間:2021/3/11閱讀:1065
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Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法:

        1、 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配置液加入到25mgBSA的蛋白標(biāo)準(zhǔn)管中,*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,即為25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制成的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液                可-20℃長期保存。

        2、 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見,通常使用                0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

        3、 做標(biāo)準(zhǔn)曲線。將標(biāo)準(zhǔn)品按0,1,2,4,8,12,16,20ul加到96孔板中,不足20ul的加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20ul。

        4、 將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度,加到96孔板中,使待測樣品總體積也為20ul。

        5、 每孔加入考馬斯亮藍(lán)G250溶液200ul,充分混勻(可將酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30s),室溫放置3-5min后,以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號做參比,在                 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品蛋白含量(ug)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        6、 如用分光光度計(jì)測定,請?jiān)诘谌降臅r(shí)候?qū)?biāo)準(zhǔn)品體積改為1ml,濃度梯度用生理鹽水稀釋為0,1,2,5,10,15,30ug/ml?;蚋鶕?jù)樣                品調(diào)整濃度梯度。

        7、 將樣品稀釋至合適濃度,加到小試管中,使待測樣品總體積也為1ml。

        8、 每只試管加考馬斯亮藍(lán)G250溶液3ml,充分混勻,室溫放置3-5min后,以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號做參比,在 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。

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