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細胞核的分離技術(shù)說明

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細胞核的分離技術(shù)說明

(1)細胞懸浮于適量預(yù)冷的溶液A中,吹打均勻后加入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,一手持之,一手將勻漿杵垂直插人管中,左右轉(zhuǎn)動同時上下移動勻漿杵,研磨若干次,用3層紗布過濾后(也可采用低速離心的方法)以去除未破裂細胞,后收集勻漿液于離心管中,然后制備一張滴片,做好標(biāo)記,顯微鏡下觀察完整細胞數(shù)量。如果細胞數(shù)量過多,則繼續(xù)勻漿,如果非常少,則勻漿完畢。

(2)將裝有勻漿液的離心管配平后,放人低溫離心機,4℃,以2500r/min離心15min;棄上清,將沉淀物用6ml含0.1%(V/V)TitonX-100的溶液A懸浮沉淀物,以2500r/min,離心15min;棄上清。

(3)將沉淀懸浮于6ml溶液B中,取6支超速離心管,每管加6ml溶液C,然后把細胞核懸液鋪在溶液C上層,以25 000r/min離心60min。

(4)棄去上清,用溶液A輕輕蕩洗管壁及沉淀物表面兩次。將離心管倒置,用濾紙擦干管口。

(5)向離心管底部滴加幾滴溶液A,用玻璃棒輕輕攪勻,然后補加10 ml溶液A,以2500g離心20min,棄上清液,沉淀物為純化的細胞核。

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