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原代貼壁細胞吉姆薩染色法

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原代細胞染液制備:
      1. 稱取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油;
      2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內(nèi)充分混合,研磨至無顆粒;
      3. 將剩余的甘油倒入研缽,于56℃保溫2h;
      4. 加入33ml純甲醇混勻,即為吉姆薩母液,將其保存于棕色試劑瓶內(nèi);
      5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液。
 
      貼壁細胞染色步驟:
      1. 去除培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)液,用平衡鹽溶液反復(fù)漂洗單層培養(yǎng)物2次;
      2. 加入平衡鹽溶液,再逐滴加入等體積甲醇,邊加邊混合,靜置10min;
      3. 將50%甲醇-BSS混合液丟棄,加入新鮮的甲醇液浸泡固定細胞10min,然后用甲醇漂洗細胞1次;
      4. 將瓶內(nèi)細胞干燥后儲存或直接染色;
      5. 按2ml/cm2 的比例滴加吉姆薩染液,覆蓋細胞層,染色2min;
      6. 移除染液,用自來水沖洗掉粉紅色背景后,再用去離子水沖洗細胞;
      7. 用顯微鏡觀察單層潮濕細胞。若細胞已干,可重新使細胞潮濕后再觀察。
 
      結(jié)果:
      細胞核被染成紫紅色或紫藍色,而細胞質(zhì)則被染成淺紅色。
 
      原代細胞吉姆薩染色法注意事項:
      1. 染液宜現(xiàn)用現(xiàn)配,舊染液染色效果不佳。染液保存時間不宜超過48h;
      2. 吉姆薩對pH極敏感,因此,緩沖液pH要準確,否則染色效果不佳。如用染色缸染色時,隨染色時間的延長,在染液表面常形成一層氧化膜(發(fā)亮)易附著在玻片上形成污穢,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是現(xiàn)配者時,染色前應(yīng)先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進行染色。染色完畢,應(yīng)把標(biāo)本浸入水中漂洗染液。
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