【目的】細(xì)胞系為提高 L-蘋果酸產(chǎn)量及木糖利用率，以寄生曲霉(Aspergillus parasiticus CICC40365)為菌種，木糖為碳源，對其發(fā)酵工藝及木糖代謝途徑進(jìn)行初步研究。

【方法】采用單因素試驗和響應(yīng)曲面法(Box-Behnken 設(shè)計)對培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。

【結(jié)果】獲得*培養(yǎng)基配方為：木糖 100.0 g/L、硫酸銨 2.0 g/L、酵母浸粉 3.0 g/L、硫酸鎂 0.20 g/L、硫酸錳 0.15 g/L、硫酸亞鐵 0.08 g/L、碳酸鈣 80.00 g/L，L-蘋果酸的產(chǎn)量為 53.58 g/L，較優(yōu)化前提高 40.5%。發(fā)酵條件較好組合為：接種量為 8% (體積比)、搖瓶裝液量 60 mL/250 mL、發(fā)酵溫度 32 °C、搖床轉(zhuǎn)速 170 r/min、發(fā)酵周期 8 d，L-蘋果酸的產(chǎn)量為 55.47 g/L。Mg2+、Mn2+對木糖代謝中相關(guān)酶的影響研究結(jié)果表明，木酮糖激酶在該菌株代謝木糖過程中起著重要作用。

【結(jié)論】寄生曲霉 CICC40365 能夠較好地利用木糖發(fā)酵產(chǎn) L-蘋果酸，其產(chǎn)量及木糖的利用效率均得到提高。

L-蘋果酸(L-malic acid，簡稱 LMA)是生物體內(nèi)三羧酸循環(huán)的成員之一，它是一種重要的有機酸，被廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。 L-蘋果酸的主要方法有直接提取法、轉(zhuǎn)換法、發(fā)酵法。目前發(fā)酵法 L-蘋果酸的研究相對較少，發(fā)酵法主要分為一步法和兩步法。一步發(fā)酵法是采用一種微生物直接利用糖質(zhì)原料進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn) L-蘋果酸；兩步發(fā)酵法是兩種不同功能的微生物，將糖質(zhì)原料先轉(zhuǎn)化為延胡索酸，再轉(zhuǎn)化為 L-蘋果酸。后者對發(fā)酵條件要求很嚴(yán)格，并且發(fā)酵周期長，產(chǎn)酸率較低，副產(chǎn)物也較多，不適合工業(yè)化；而一步發(fā)酵法可以避免上述缺點，且產(chǎn)物安全性高，備受消費者青睞。

對于直接利用糖質(zhì)原料一步發(fā)酵法產(chǎn) L-蘋果酸的菌種多為黃曲霉 (Aspergillus flavus)和裂褶菌屬，以色列 Battat 等報道利用黃曲霉 ATCC13697 發(fā)酵產(chǎn)蘋果酸，產(chǎn)酸達(dá) 113 g/L，強度為 0.59 g/(L·h)；胡純鏗報道了黃曲霉 H-98 發(fā)酵產(chǎn) L-蘋果酸，zui高產(chǎn)酸超過 50 g/L。錢秀萍等報道了裂褶菌利用葡萄糖、果糖產(chǎn) L-蘋果酸的產(chǎn)量分別為 10.48 g/L 和 6.28 g/L。雖然細(xì)胞系利用黃曲霉發(fā)酵的產(chǎn)酸量很高，但是發(fā)酵中可能會產(chǎn)生黃曲霉素，存在安全隱患，而該研究所采用的寄生曲霉，未見有文獻(xiàn)報道利用其發(fā)酵產(chǎn) L-蘋果酸，且安全性有保障。
HPLC≥98%    Cochinchinenin C    劍葉龍血素C    20mg/支
HPLC≥98%    demethoxyaschantin    辛夷脂素    20mg/支
HPLC≥98%    Linderane    烏藥醚內(nèi)脂    20mg/支
HPLC≥98%    Fisetin    漆黃素(非瑟酮/紫鉚素)    20mg/支
HPLC≥98%    Piefeltarraenin ⅠA    苦玄參苷ⅠA    20mg/支
HPLC≥98%    Piefeltarraenin ⅠB    苦玄參苷ⅠB    20mg/支
HPLC≥98%    barbaloin    蘆薈苷    20mg/支
HPLC≥98%    Atractylenolide I    白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ    20mg/支
細(xì)胞系