1.收到細(xì)胞株，*時間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。
2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞株在低于正常生長溫度情況下，會調(diào)整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài)，在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。
3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時，則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞株，*次處理也可以依照第二種情況。