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如何檢測細胞培養(yǎng)基中支原體污染

閱讀:311      發(fā)布時間:2025-2-5
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檢測細胞培養(yǎng)基中支原體污染的方法有多種,以下是幾種常用的檢測方法:

直接觀察法:

使用相差顯微鏡或電子顯微鏡直接觀察細胞培養(yǎng)物中是否存在支原體。

相差顯微鏡可以觀察到支原體呈小點狀或絲狀結構,在細胞周圍或細胞質中移動。

電子顯微鏡可以提供更高分辨率的圖像,清晰地顯示支原體的形態(tài)和結構。

但此方法需要專業(yè)的設備和技術人員,且檢測靈敏度相對較低。

DNA染色法:

使用特定的DNA染料,如Hoechst 33258DAPI,對細胞進行染色。

支原體的DNA也會被染色,在熒光顯微鏡下可以觀察到細胞核周圍的小點狀熒光,即為支原體。

此方法相對簡單,但也需要熒光顯微鏡,且可能受到其他因素的干擾。

PCR檢測法:

通過聚合酶鏈反應(PCR)技術檢測細胞培養(yǎng)物中的支原體DNA。

提取細胞培養(yǎng)物中的DNA,然后使用針對支原體特定基因序列的引物進行PCR擴增。

如果存在支原體污染,PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳中會出現(xiàn)特定的條帶。

此方法具有高靈敏度和特異性,可以檢測到微量的支原體污染。

酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法:

利用ELISA試劑盒檢測細胞培養(yǎng)上清液中的支原體抗原。

此方法操作相對簡單,不需要特殊的設備。

但可能存在一定的假陽性和假陰性結果。

支原體培養(yǎng)法:

將細胞培養(yǎng)物接種到特定的支原體培養(yǎng)基上,進行培養(yǎng)和觀察。

如果存在支原體污染,支原體會在培養(yǎng)基上生長,形成菌落。

此方法檢測周期較長,通常需要數(shù)天甚至一周以上的時間,且對培養(yǎng)條件要求較高。

一步法恒溫支原體檢測試劑盒:

該試劑盒采用恒溫基因擴增技術和顯色技術,對樣品的支原體基因組DNA進行恒溫擴增。

反應完后,通過反應管的顏色即可對結果進行判斷。

此方法具有方便、省時、靈敏度高、無需特殊設備等優(yōu)點。

綜上所述,檢測細胞培養(yǎng)基中支原體污染的方法有多種,可以根據(jù)實驗條件和需求選擇合適的方法。在實際操作中,應嚴格按照說明書進行操作,并注意實驗環(huán)境的無菌控制,以確保檢測結果的準確性。

 


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