HaCaT細(xì)胞是人類(lèi)永生化表皮細(xì)胞，由角質(zhì)形成細(xì)胞培育而來(lái)的，保留了角質(zhì)形成細(xì)胞分化能力，是非腫瘤來(lái)源的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株，與正常人角質(zhì)形成細(xì)胞分化特性相似，可以繁殖150代以上，但不是腫瘤細(xì)胞，不具有腫瘤特性。
細(xì)胞名稱(chēng) | HaCaT（人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞） |
細(xì)胞來(lái)源 | 一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚 |
形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
營(yíng)養(yǎng)體系 | 89%MEM(abs9503)+10%胎牛血清優(yōu)級(jí)(abs972)+1%雙抗(abs9244)+0.2%牛腦垂體提取物(abs9119) |
傳代 | 1:3—1:5，傳代周期2-3天 |
凍存 | 無(wú)血清細(xì)胞凍存液plus(abs9478)/ 90%培養(yǎng)液+10%DMSO |
應(yīng)用 | 皮膚生物學(xué)和分化研究 |
該細(xì)胞較難消化，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚紅(abs47014938)消化5min作用，有時(shí)可能高達(dá)10min，主要由于細(xì)胞不同分化程度和融合度而異。注意消化前一定要用PBS清洗細(xì)胞2-3次，鋪板時(shí)一定要均勻，因?yàn)镠aCat成片生長(zhǎng)，鋪板不勻會(huì)存在局部生長(zhǎng)過(guò)密難以消化，生長(zhǎng)稀疏部分容易消化過(guò)度的情況。
圖a 低Ca2+條件下HaCat細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)和圖b高Ca2+條件下HaCat細(xì)胞分化狀態(tài)
10%FBS培養(yǎng)體系中的Ca2+足以誘導(dǎo)該細(xì)胞分化，也就是說(shuō)，正常培養(yǎng)體系下，該細(xì)胞會(huì)逐漸分化，分化前細(xì)胞近紡錘形，排列較松散，分化后細(xì)胞向立方體發(fā)展，排列緊密，呈片狀生長(zhǎng)。
低鈣離子條件下，HaCat增殖更快，K14的表達(dá)僅限于表皮基底層，而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了HaCat細(xì)胞分化表型的獲得，與第6天相比，分化標(biāo)記K10在HaCaT細(xì)胞中的表達(dá)在第14天顯著增加，幾乎100%的細(xì)胞是陽(yáng)性的，這可能和細(xì)胞密度有關(guān)。
牛腦垂體物常用作無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)補(bǔ)充劑，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞增殖，廣泛用作各種上皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞培養(yǎng)中的補(bǔ)充劑。此外，其具有抗氧化能力，可對(duì)抗過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死，蛋白質(zhì)氧化，膜破碎和DNA損傷。
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貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
abs9119 | 牛腦垂體提取物 | 20mg/20mg*5 |
abs972 | 胎牛血清（優(yōu)級(jí)） | 500mL |
abs9503 | MEM培養(yǎng)基（含NEAA，含L-谷氨酰胺，不含丙酮酸鈉，含HEPES） | 500mL |
abs9244 | 青霉素-鏈霉素溶液（100×雙抗） | 100mL |
abs9478 | 無(wú)血清細(xì)胞凍存液plus | 100mL |
參考文獻(xiàn)
[1] Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.
[2] Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621
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