国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

細胞凍存與復蘇

時間:2023-2-8 閱讀:1652
分享:

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,利用凍存技術將細胞冷凍保存在-196℃液氮中,可以使細胞暫時停止生長并保留細胞特性,以便在需要時再復蘇細胞用于實驗。同時保存適量的細胞,可以防止細胞在培養(yǎng)過程中因受到污染或其他意外事件導致細胞丟種,起到細胞保種的作用。

細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融"的原則,慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外,減少細胞內形成冰晶的機會;快融以保證細胞外結晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細胞內,再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。

細胞凍存時需向培養(yǎng)基中加入冷凍保護劑,可保護細胞在冷凍時免受溶液損傷和冰晶損傷。冷凍保護劑可根據其是否穿透細胞膜分為滲透性和非滲透性兩類:

1.滲透性冷凍保護劑可以滲透到細胞內,一般是一些小分子物質,主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。

2.非滲透性冷凍保護劑不能滲透到細胞內,一般是些大分子物質,主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥YI基淀粉等。

(一)細胞凍存一般步驟

1. 準備已滅菌的凍存培養(yǎng)液,并4℃預冷;

2. 選取對數生長期的細胞,棄掉細胞培養(yǎng)液,用細胞消化酶(如胰蛋白酶)進行消化,適時去掉消化液,加入少量新鮮培養(yǎng)液。懸浮生長的細胞不進行消化處理,直接將細胞收集于離心管中離心,1000 rpm,5-10 min

3. 棄去上清,逐漸加入適量預冷的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節(jié)細胞濃度在5×1061×107/mL之間;

4. 上述細胞分裝于2 mL凍存管中,每管1-1.5 mL。在凍存管上標明細胞名稱、凍存日期和操作者;

5. 凍存:標準的降溫速率開始為-1-2/ min,當溫度降到-80℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2 h ,然后放入-80℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。

(二)細胞復蘇一般步驟

1. 從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃水浴中,并不時搖動使其盡快融化;

2. 37℃水浴中取出凍存管,在無菌條件下取出細胞,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,混勻,以1000 rpm,5-10 min離心;

4. 棄去上清液,加入適量培養(yǎng)液重懸細胞,計數,調整細胞密度接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);

5. 次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

(三)注意事項

1. 配制好的細胞凍存液要進行預冷,新鮮配制的凍存液會產生大量的熱。

2. 凍存的細胞在半年后,建議取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話 產品分類
在線留言
万山特区| 安多县| 晋江市| 高雄市| 新和县| 镇远县| 祁门县| 元朗区| 滨海县| 左贡县| 冀州市| 林甸县| 开封市| 淮滨县| 德惠市| 上栗县| 胶州市| 肥城市| 墨脱县| 泽普县| 枣强县| 通榆县| 遂昌县| 东光县| 乐清市| 农安县| 左贡县| 威海市| 溧阳市| 华坪县| 泰安市| 大埔区| 寻乌县| 库尔勒市| 新邵县| 榆林市| 沛县| 永丰县| 甘谷县| 隆化县| 塔河县|