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人正常組織來源細(xì)胞材料試劑：

FITC標(biāo)記的單克隆抗體，pH7.4 、0.15Mol/L PBS，3%的多聚甲醛，PBS-T(pH7.4 、0.15Mol/L PBS 含0.2% Tween 20)，胎牛血清，熒光細(xì)胞洗液：pH7.4 、0.15Mol/L PBS含2%胎牛血清及0.1%NaN3 。FACS管，Tip頭，移液器。

儀器：低溫水平離心機(jī), 37°C水浴箱，熒光顯微鏡，共聚焦激光掃描顯微鏡，流式細(xì)胞計(jì)

方法：

1 懸浮細(xì)胞的染色：

(1)收獲正常和誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞(0.5~1′106)，PBS洗2次，1000rpm′10min。

(2)3%多聚甲醛冰浴10min，PBS洗2次，1000rpm′10min。

(3)加入PBS-T溶液，37°C孵育15min，PBS洗2次，1000rpm′10min。

(4)加入200ml胎牛血清，室溫反應(yīng)30min。

(5)加入5ml FITC標(biāo)記的TFAR19單抗(終濃度為1：40)，4°C反應(yīng)30min

(6)熒光細(xì)胞洗液洗2次，1000rpm 10min。

人正常組織來源細(xì)胞結(jié)果觀察：將細(xì)胞沉淀滴片，熒光顯微鏡及共聚焦激光顯微鏡下觀察TFAR19在細(xì)胞中的定位。同時用流式細(xì)胞計(jì)定量檢測TFAR19蛋白的平均熒光強(qiáng)度。

(1) 貼壁生長的對數(shù)期細(xì)胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片)，讓其爬片生長，待長到

50%~80%滿時，凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞。

(2) 將不同時間點(diǎn)處理的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，染色步驟同上。

(3) 將染色的爬片細(xì)胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上，熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在人正常組織來源細(xì)胞中的定位。