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技術(shù)文章

間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)原理的概述

閱讀:277          發(fā)布時(shí)間:2017-9-21

間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一群中胚層來(lái)源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞,在適宜的培養(yǎng)條件下可分化成多種組織細(xì)胞,包括成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。

間質(zhì)干細(xì)胞zui早是從骨髓中分離得到的,正常情況下,它在骨髓中的比例非常低,僅占單核細(xì)胞的1/105 ~1/104 。骨髓中單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞密度較大,為1.090 g/ml左右,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml。為此利用一種密度介于1.075~1.092 g/ml之間而近于等滲的溶液(分層液)進(jìn)行密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。

在骨髓的原代培養(yǎng)物中,除了貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的間質(zhì)干細(xì)胞外,還混雜著一些巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、造血細(xì)胞及紅細(xì)胞等,要得到較均一的間質(zhì)干細(xì)胞,必須除去其他細(xì)胞。根據(jù)其他細(xì)胞的特性,可采用不同的方式排除它們。對(duì)于紅細(xì)胞,因其不貼壁,可通過(guò)換液除去。對(duì)于貼壁的單核巨噬細(xì)胞,可根據(jù)其黏附能力的不同,通過(guò)調(diào)整Trypsin/EDTA 的消化時(shí)間,保證間質(zhì)干細(xì)胞在短暫的作用時(shí)間內(nèi)與塑料培養(yǎng)瓶壁分離,而巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、造血細(xì)胞等仍貼附于培養(yǎng)瓶壁,從而使間質(zhì)干細(xì)胞與其他的貼壁細(xì)胞得到分離。

在傳代培養(yǎng)中,接種密度是影響體外培養(yǎng)間質(zhì)干細(xì)胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時(shí),間質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力明顯提高,而誘導(dǎo)細(xì)胞分化時(shí)則需要較高的細(xì)胞密度,這可能與分化時(shí)細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用有關(guān)。而在培養(yǎng)過(guò)程中,若細(xì)胞過(guò)度融合會(huì)促進(jìn)其分化趨向,故要保持干細(xì)胞未分化狀態(tài),要及時(shí)傳代。
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/FITC  熒光素標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-BSA  兔抗牛血清白蛋白抗血清     1ml
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干細(xì)胞

 

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