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轉(zhuǎn)化細(xì)胞三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)

閱讀:235          發(fā)布時(shí)間:2018-4-17

1. 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話,你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言,養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)?,形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長(zhǎng)。

3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候,初學(xué)者往往生怕轉(zhuǎn)化細(xì)胞消化過(guò)度,早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來(lái),用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,37度消化過(guò)一夜,細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,動(dòng)作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。
Naratriptan Resolution Mixture    20mg    那拉曲坦混合物標(biāo)準(zhǔn)品    
Natamycin     200mg    納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品    7681-93-8 
Nateglinide     200mg    那格列奈標(biāo)準(zhǔn)品    105816-04-4 
Nateglinide Related Compound A    10mg    那格列奈相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    7077/5/6
N-Demethylazithromycin    15mg    n-去甲基阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品    
Near IR System Suitability    ea    近紅外系統(tǒng)適用性參考標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品    
Nefazodone Hydrochloride    200mg    萘法唑酮鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品    82752-99-6 
Nefazodone Related Compound A    25mg    萘法唑酮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    57059-62-8 
Nefazodone Related Compound B    25mg    萘法唑酮相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    
Neostigmine Bromide     200mg    溴化新斯的明標(biāo)準(zhǔn)品    114-80-7 
Neotame     200mg    紐甜標(biāo)準(zhǔn)品    165450-17-9 
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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