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技術(shù)文章

轉(zhuǎn)化細胞三個小經(jīng)驗

閱讀:233          發(fā)布時間:2018-4-17

1. 轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高)

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言,養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學者往往生怕轉(zhuǎn)化細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候,37度消化過一夜,細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時的機械應(yīng)力相當大,對細胞的傷害也是很大的。
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