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技術(shù)文章

如何繼續(xù)培養(yǎng)已購買的干細(xì)胞

閱讀:410          發(fā)布時(shí)間:2018-5-15

為避免客戶接收不當(dāng)造成干細(xì)胞死亡。我公司溫馨提示;細(xì)胞一般經(jīng)我司培養(yǎng)兩周復(fù)蘇后送與客戶。因細(xì)胞是冷凍保存,我司均以冰袋加泡沫箱快遞運(yùn)輸.客戶在接收細(xì)胞產(chǎn)品時(shí),需按以下方法操作。避免細(xì)胞出現(xiàn)其他問題。

1. 收到細(xì)胞株包裹時(shí),請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到液氮)。

2. 冷凍細(xì)胞解凍程序: 2.1. 依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí),務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。 2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對(duì)細(xì)胞而言差異極大,請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。

3. 將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后,以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5. 對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將干細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

Resorcinol 200mg 間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品 108-46-3 

Propylene Carbonate 200mg 碳酸丙烯酯標(biāo)準(zhǔn)品 108-32-7 

Ethambutol Hydrochloride 200mg 鹽酸乙胺丁醇標(biāo)準(zhǔn)品 1070-11-7

1,4-Benzoquinone 200mg 1,4-苯醌標(biāo)準(zhǔn)品 106-51-4

P-Chloroaniline 200mg 對(duì)氯苯胺標(biāo)準(zhǔn)品 106-47-8

Tamsulosin Hydrochloride 200mg 鹽酸坦索羅辛標(biāo)準(zhǔn)品 106463-17-6 

Aspartame Acesulfame 200mg 阿斯巴甜安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品 106372-55-8

12-Hydroxystearic Acid 200mg 12-羥基硬脂酸標(biāo)準(zhǔn)品 106-14-9 

Nateglinide 200mg 那格列奈標(biāo)準(zhǔn)品 105816-04-4 

Bisoprolol Fumarate 200mg 富馬酸比索洛爾標(biāo)準(zhǔn)品 104344-23-2
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