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技術文章

elisa試劑盒報價測定中表達產(chǎn)物的檢測

閱讀:386          發(fā)布時間:2018-8-30

    elisa試劑盒報價表達產(chǎn)物分真核表達產(chǎn)物和原核表達產(chǎn)物,下面看看ELISA試劑盒是如何檢測這兩種表達產(chǎn)物的吧!
(一)原核(大腸桿菌表達系統(tǒng))表達產(chǎn)物
1、表達上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行ELISA試劑盒檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
(二)ELISA試劑盒真核表達產(chǎn)物
1、 細胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細胞,將培養(yǎng)基和細胞轉移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、 細胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理。

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