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elisa試劑盒報(bào)價(jià)測定中表達(dá)產(chǎn)物的檢測

閱讀:385          發(fā)布時(shí)間:2018-8-30

    elisa試劑盒報(bào)價(jià)表達(dá)產(chǎn)物分真核表達(dá)產(chǎn)物和原核表達(dá)產(chǎn)物,下面看看ELISA試劑盒是如何檢測這兩種表達(dá)產(chǎn)物的吧!
(一)原核(大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)產(chǎn)物
1、表達(dá)上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行ELISA試劑盒檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
(二)ELISA試劑盒真核表達(dá)產(chǎn)物
1、 細(xì)胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
2、 細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。

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