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技術(shù)文章

兔胎盤泌乳素(PL)elisa試劑盒實驗操作步驟

閱讀:238          發(fā)布時間:2020-3-4

兔胎盤泌乳素(PL)elisa試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋: 本試劑盒提供原倍標準品一支, 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

16μg/ml  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

8μg/ml  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

4μg/ml  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2μg/ml  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1μg/ml  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式, 將樣品的 OD 值代入方程式, 計算出樣品濃度, 再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

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