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轉(zhuǎn)化細(xì)胞一般過程

閱讀:106          發(fā)布時間:2017-9-4

一、轉(zhuǎn)化細(xì)胞準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實驗失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細(xì)胞(視實驗?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。
理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養(yǎng),分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng),腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理,盡快培養(yǎng),因故不能馬上培養(yǎng)時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時應(yīng)嚴(yán)格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養(yǎng)
將取得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng),一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),按要求以一定的量(以每毫升細(xì)胞數(shù)表示)接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好,形態(tài)是否正常,有無污染,培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。
IL21R     Others    Cynomolgus    食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL12A     Others    Cynomolgus    食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SELP     Others    Cynomolgus    食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
COLEC10     Others    Cynomolgus    食蟹猴 COLEC10 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SELP     Others    Rat    大鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD274     Others    Rat    大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DLL1     Others    Rat    大鼠 DLL1 / Delta-like 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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