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  轉(zhuǎn)化細胞可以自我更新并分化成各類成體細胞, 常用的多能干細胞主要是廢棄胚胎來源的胚胎干細胞(embryonic stem cell, ESc)和重 編 程 成體細胞獲得的誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cell, iPSc)。

iPSc是通過過表達胚胎期的多能性標志, 將已經(jīng)分化的終末細胞重編程至多能狀態(tài)獲得的, 因其不需要破壞胚胎, 又具ESc相近的生物學特性, 是近期醫(yī)學和生物學研究的熱點。iPSc通過定向誘導分化, 可以獲得各類成熟的、有功能的細胞, 這一方面是研究生物發(fā)育的忠實體外模型, 另一方面為再生醫(yī)學提供了優(yōu)良的種子細胞。肝臟是重要的代謝臟器, 肝細胞如何再生、肝細胞代謝功能障礙疾病的病理機制以及肝細胞移植治療肝臟類疾病的種子細胞都可以通過研究誘導iPSc的肝細胞定向誘導分化解決。

早在2004年, 就有對人多能干細胞進行肝分化的研究報道。當時終末分化所得的白蛋白(albumin, ALB)陽性細胞僅為4%。隨著技術(shù)的改進和對肝細胞分化過程中信號通路研究的日益透徹, 誘導分化多能干細胞至成熟肝細胞的效率也日益提高, Duncan研究組提出了四步法誘導多能干細胞分化獲得成熟肝細胞的方案。

該方案總結(jié)了各個提高分化效率的轉(zhuǎn)化細胞因子的效果并進行優(yōu)化, 還提出每一步的分化結(jié)果的質(zhì)控, 有效地將肝細胞核因子4A(hepatocyte nuclear factor4alpha, HNF4A)和ALB陽性細胞獲得率提高到了70%以上。我們按照Duncan的分化方案進行iPSc的肝細胞誘導分化, 發(fā)現(xiàn)肝細胞核因子4A陽性率可以達到70%, 但是ALB 陽性細胞獲得率僅為20%, 而且歷時20 d, 在第三和第四階段誘導分化時, 因為細胞形成復(fù)層, 很容易在換液時造成培養(yǎng)皿中的細胞整片飄起, zui終引起分化失敗。我們在第二和第三階段分化結(jié)束時行細胞傳代, 探討傳代破壞細胞之間的連接是否對第三和第四階段分化的結(jié)果產(chǎn)生影響, 能否優(yōu)化方案, 促進多能干細胞向肝細胞的定向誘導分化。
97%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid A    丹酚酸A
≥95%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid B    丹酚酸B
98%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid C    丹酚酸C
≥98%    規(guī)格:        *：    Paeonol    丹皮酚
≥95%    規(guī)格:        *：    Lobetyolin    黨參炔苷
≥97%    規(guī)格:        *：    deltaline    德爾塔林
≥97%    規(guī)格:        *：    Momordin Ic    地膚子皂苷Ic
≥98%    規(guī)格:        *：    Indirubin    靛玉紅
98%    規(guī)格:        *：    eugenol    丁香酚
≥97%    規(guī)格:        *：    3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyde    丁香醛
轉(zhuǎn)化細胞