目錄:鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司>>細胞分類>>CRO實驗服務(wù)>> iCell-CRO01穩(wěn)定細胞株構(gòu)建/鏡像綺點（iCell）
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系（穩(wěn)定表達細胞株）指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩(wěn)定表達該基因。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經(jīng)細胞克隆挑選得到的，由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統(tǒng)一，傳代過程中細胞的基因表達保持穩(wěn)定。
用轉(zhuǎn)染質(zhì)?；虿《厩秩镜姆椒▽?gòu)建好的含靶基因的載體導入細胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應(yīng)的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新mei素（neomycin）。
篩選穩(wěn)定細胞株的兩種方法
1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。
另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。
穩(wěn)定細胞株構(gòu)建/鏡像綺點（iCell）
服務(wù)流程
1、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上，如需病毒轉(zhuǎn)染，則包裝病毒。
2、篩選濃度測定：以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞應(yīng)達到 60%-80% 覆蓋。
4、細胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結(jié)果。
終交付
1、病毒滴度檢測報告；穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株；
2、結(jié)題報告，包括詳細的實驗流程，測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜和滴度測定報告和q-P
鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：
一、原代細胞服務(wù)
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等；
原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù)；
二、細胞株/系服務(wù)
細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書；
細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導；
細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等；
三、iPS細胞
iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
iPS細胞增殖及冷凍保存；
iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習；
新藥及實驗儀器上市前評估；
四、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務(wù)等
五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等
7
化工儀器網(wǎng)