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細胞破碎的3種主要方法

閱讀:17239        發(fā)布時間:2019-5-22
一、機械法

1.勻漿器:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎。此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。較易造成堵塞的團狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細胞器,質(zhì)地堅硬,易損傷勻漿閥,也不適合用該法處理。

2.組織搗碎:一般用于動物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。

3.研缽:多用于細菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。

二、化學(xué)及生物化學(xué)法

1.自溶法:在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?,利用組織細胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細胞破碎的方法。此過程需較長時間,常用少量防腐劑如甲苯等防止細胞的污染。

2.化學(xué)滲透法:某些有機溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來。

3.酶溶法:利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細胞壁分解,使細胞內(nèi)含物釋放出來。

三、物理法

1.反復(fù)凍溶法:將待破碎的細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細胞內(nèi)冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結(jié)構(gòu)破碎。

2.急熱驟冷法:將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。

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