HFLS人成纖維樣滑膜細胞

"選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻小心勿造成氣泡，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計時，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清包括不同批次對細胞的影響?！炯毎s寫】"    HFLS細胞

【細胞名稱】    HFLS(人成纖維樣滑膜細胞)

【背景資料】    見細胞說明書

【細胞來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學建系

【代次】    P4

【規(guī)格】    復蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

"細胞凍存及復蘇基本知識普及：

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。

除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜DMSO，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 

采用""慢凍快融""的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)-196℃?！炯毎麛?shù)】"    1*10（6）

【生物安全級別】    1

【生物體】    人

【組織來源】    滑膜

【細胞形態(tài)】    成纖維細胞樣

【細胞特性】    貼壁

【細胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細胞檢測】    細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

HFLS人成纖維樣滑膜細胞

細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程請嚴格遵照無菌操作

1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞注意把握消化時間，通?？刂圃?-2min

2、鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時不建議消化到細胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散

3、取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液每周2-3次，待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)

1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清，原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時

2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

3、如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室?！九囵B(yǎng)條件】"    詳見細胞說明書

【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

【凍存條件】    詳見細胞說明書

【主要文獻】    請具體查閱相關發(fā)表文章

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：

無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。

每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面。

無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。

小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計時，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。