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當前位置：武漢艾美捷科技有限公司>>技術文章>>IP檢測過程中的重、輕鏈干擾解決方案
免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
在免疫沉淀實驗后的WB驗證環(huán)節(jié)中，當使用常規(guī)的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時，通常會出現(xiàn)對應免疫沉淀一抗變性后產(chǎn)生的重鏈（50kDa）和輕鏈（25kDa）兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在此附近時，就會受到這兩條帶的干擾。
如何避免IP檢測過程中的重、輕鏈干擾，兩種方案可供參考：
方案一：選擇WB一抗時，選擇和IP用一抗不同的種屬，避免IP一抗的干擾
山羊抗兔IgG二抗，HRP標記，AMJ-AB2003
方案二：選擇只和重鏈或輕鏈反應的二抗
IP™ 山羊抗小鼠IgG輕鏈二抗，HRP標記，AMJ-AB2016
IP™ 山羊抗兔IgG重鏈二抗，HRP標記，AMJ-AB2019
如果目標蛋白分子量小于30KD，為了避免抗體輕鏈的干擾，選擇重鏈特異性二抗；如果目標蛋白分子量大于30KD，為了避免抗體重鏈的干擾，選擇輕鏈特異性二抗。
IP實驗常見問題匯總：
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