今天我們就主要來聊一聊小G蛋白活性增強(qiáng)劑——鳥苷酸交換因子（GEF），GEF 是通過催化其目標(biāo) GTPase上的核苷酸交換來發(fā)揮作用，GEF與核苷酸結(jié)合的 GTPase 結(jié)合，這會導(dǎo)致結(jié)合的核苷酸被釋放，從而產(chǎn)生不含核苷酸的GEF-GTPase 反應(yīng)中間體。這種不含核苷酸的復(fù)合物隨后將結(jié)合新的核苷酸，然后GEF再從GTPase 中釋放出來。

由于GEFs對GDP-GTPases的親和力高于對相應(yīng)GTP-GTPases的親和力，在正常細(xì)胞中GTP和GDP比率約為10:1，GEFs將推動從GDP-GTPases到GTP-GTPases的轉(zhuǎn)換。

艾美捷GEF活性檢測試劑盒是一款基于熒光法的檢測GTP酶上的核苷酸轉(zhuǎn)換的試劑盒，可適用于常規(guī)的96孔格式或高通量384孔格式。

GEF活性檢測試劑盒包含檢測所需的所有試劑：

1.Exchange Buffer

2.His標(biāo)簽 Cdc42蛋白

3.His標(biāo)簽 Rac1 蛋白

4.His標(biāo)簽 RhoA 蛋白

5.His標(biāo)簽 hDbs 蛋白（作為 Cdc42 和 RhoA 的GEF的陽性對照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

檢測原理：該試劑盒是通過檢測熒光核苷酸類似物 N-甲基鄰氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）對 GTPase 的結(jié)合情況來檢測GEF的活性的。一旦mant-GTP與 GTPase 結(jié)合， mant-GTP的熒光強(qiáng)度（Ex：360 nm，Em：440 nm）顯著增加，通過檢測游離的mant-GTP和GTPase 結(jié)合的 mant-GTP 之間的熒光值差異，即可檢測樣本中GEF的活性。

GEF活性檢測試劑盒的主要用途和應(yīng)用:

1.測定未知GEFs活性；

2.小GTPases及其相關(guān)GEFs的生化特性表征；

3.研究不同輔助因子或蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)EF活性的調(diào)控；

4.篩選GEFs或GTPases突變蛋白的活性和底物特異性；

5.HTS(高通量篩選)篩選鑒定GEF抑制劑。

檢測結(jié)果展示：

圖 1.  96 孔板中Dbs 對于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交換活性

圖 2.384 孔板中Dbs 對于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交換活性

Cytoskeleton專注于生物化學(xué)和細(xì)胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾（PTM）、細(xì)胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品，尤其以細(xì)胞骨架相關(guān)研究見長，既能滿足于樣品較少的科學(xué)研究，也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。艾美捷科技是Cytoskeleton的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的GEF活性檢測試劑盒。