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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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開曼生物 前列腺素 E2快速檢測(cè)ELISA試劑盒檢測(cè)原理

時(shí)間:2022/7/12閱讀:292
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背景:

前列腺素E2是多種細(xì)胞內(nèi)花生四烯酸的主要代謝產(chǎn)物,象類花生酸一樣,不能在胞內(nèi)儲(chǔ)存.當(dāng)細(xì)胞被激活或者提供自由花生四烯酸后,PEG2才能被合成,并釋放到胞外;在體內(nèi),通過15-脫氫酶途徑,PEG2能快速轉(zhuǎn)變成為無活性的13,14-dihydro-15-keto PGE2.PEG2的半衰期為30秒,在正常血液中的含量為3-12pg/ml.

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測(cè)ELISA試劑盒檢測(cè)原理

本試驗(yàn)基于PGE2PGE2-乙酰膽堿酯酶(AChE)結(jié)合物(PGE2示蹤劑)之間的競(jìng)爭(zhēng),以獲得*的PGE2單克隆抗體。由于PGE2示蹤劑的濃度在PGE2濃度變化時(shí)保持恒定,因此能夠結(jié)合到PGE2單克隆抗體的PGE2示蹤劑的量將與孔中的PGE2濃度成反比。該抗體-PGE2復(fù)合物與先前連接到微孔的山羊多克隆抗小鼠IgG結(jié)合。清洗培養(yǎng)板以去除任何未結(jié)合的試劑,然后將Ellman試劑(含有乙酰膽堿酯酶基質(zhì))添加到孔中。該酶反應(yīng)產(chǎn)物具有明顯的黃色,并在412 nm處強(qiáng)烈吸收。通過分光光度法測(cè)定的該顏色的強(qiáng)度與結(jié)合到孔中的PGE2示蹤劑的量成正比,該示蹤劑的量與孵化期間孔中存在的游離PGE2的量成反比;該過程的示意圖如下圖所示。

11.jpg

圖:乙酰膽堿酯酶的示意圖

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測(cè)ELISA試劑盒特點(diǎn)

已經(jīng)證明能在尿液,血液或者培養(yǎng)基樣本中使用.一般情況下,尿液或者培養(yǎng)基樣本需稀釋后,直接用于試劑盒檢測(cè);對(duì)于血液樣本,需要預(yù)先純化,因?yàn)?span style="font-family: Calibri;">PEG2在血液樣本中會(huì)很快代謝掉.

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測(cè)ELISA試劑盒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):

1.0 ml ELISA緩沖液重新配制PGE2 Express ELISA標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)容物。該溶液(散裝標(biāo)準(zhǔn)品)的濃度將為10納克/毫升。儲(chǔ)存在4°C下;該標(biāo)準(zhǔn)將穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)四周。

 

注:如果測(cè)定未用ELISA緩沖液稀釋至少10倍的培養(yǎng)基樣品,應(yīng)使用培養(yǎng)基代替ELISA緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品。

 

制備用于ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品:獲得八個(gè)干凈的試管,并將其編號(hào)為#1#8。等分800µl ELISA緩沖液至試管#1500µl ELISA緩沖液至試管#2-8。將200微升散裝標(biāo)準(zhǔn)品(10納克/毫升)轉(zhuǎn)移到試管#1中,并*混合。標(biāo)準(zhǔn)曲線上的個(gè)點(diǎn),該標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為2納克/毫升(2000微克/毫升)。通過從管#1中去除500µl并放置在管#2中連續(xù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液;*混合。接下來,從管#2中取出500µl,放入管#3中;*混合。對(duì)管道4-8重復(fù)此過程。這些稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)存時(shí)間不應(yīng)超過24小時(shí)。


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