Jackson公司用于蛋白質(zhì)印跡的偶聯(lián)物前言：

3 種檢測方法可用于蛋白質(zhì)印跡：比色法、化學(xué)發(fā)光法和熒光法。每種檢測方法在靈敏度、定量、每次檢測成本或多重檢測方面都具有優(yōu)勢。

蛋白質(zhì)印跡是一種用于從生物樣品或溶液中鑒定特定蛋白質(zhì)的分析技術(shù)。線性化的蛋白質(zhì)通過凝膠電泳分離以按大小分辨它們，然后轉(zhuǎn)移到固定蛋白質(zhì)的膜上，例如硝酸纖維素或聚偏二氟乙烯( PVDF)。用針對特定目標(biāo)蛋白質(zhì)的一抗探測膜。然后使用與報告分子偶聯(lián)的二抗來識別一抗并產(chǎn)生所需的信號。

Jackson公司：比色檢測

堿性磷酸酶 (AP) 和辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯(lián)物可用于比色檢測（圖 1(A)）。偶聯(lián)的報告酶催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色沉淀物，直接在印跡膜上顯現(xiàn)。比色檢測可以提供快速且容易獲得的結(jié)果，而無需昂貴的檢測器或廣泛的優(yōu)化。

Jackson公司：化學(xué)發(fā)光檢測

酶聯(lián)偶聯(lián)物也可用于化學(xué)發(fā)光信號檢測（圖 1(B)）。HRP 偶聯(lián)物通過將化學(xué)發(fā)光底物 (魯米諾) 氧化為發(fā)光形式來產(chǎn)生信號。

當(dāng)酶將特定底物（例如 1,2-二氧雜環(huán)丁烷）去磷酸化為發(fā)光產(chǎn)物時，AP 結(jié)合物會產(chǎn)生信號。

然后可以通過將膠卷暴露在膜上或使用冷卻的電荷耦合器件 (CCD) 相機(jī)來捕獲信號?；瘜W(xué)發(fā)光檢測具有出色的靈敏度，但對多個目標(biāo)的定量和探測可能會受到限制，開發(fā)可能需要改進(jìn)以優(yōu)化信號捕獲。

Jackson公司：熒光檢測

熒光信號檢測使用熒光染料偶聯(lián)物來顯示膜上的抗原（圖 1 (C)）。特定于染料光譜特性的波長的光用于激發(fā)熒光染料。吸收的光將染料的電子激發(fā)到更高的電子狀態(tài)，當(dāng)它們返回基態(tài)時，它們會以熒光團(tuán)的發(fā)射波長特征發(fā)射光子。光線由配備適當(dāng)濾光片的數(shù)字成像儀檢測。熒光蛋白質(zhì)印跡允許定量分析和多重探測，而無需剝離和重新印跡。

備注：

圖 1：Western 印跡的 3 種檢測方法：(A) 比色法、(B) 化學(xué)發(fā)光法和 (C) 熒光法；A. 報道酶偶聯(lián)物催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見。B. 報道酶偶聯(lián)物催化化學(xué)發(fā)光底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光形式的反應(yīng)，發(fā)射的光通過X射線膠片或CCD相機(jī)檢測。C. 報告熒光染料被其特征波長的光激發(fā)，產(chǎn)生的發(fā)射光被數(shù)字成像儀捕獲。

表 1：檢測方法的特點——優(yōu)缺點

參考文獻(xiàn)：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。