人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒操作注意事項：

1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品

6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1.血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆

3.細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒操作步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA是一種高度靈敏的雙位點酶聯(lián)免疫測定（ELISA）人類生物樣品中乳鐵蛋白的測定。僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA試劑盒試劑制備校準(zhǔn)儀：

將1.0 ml蒸餾水或去離子水加入凍干人乳鐵蛋白校準(zhǔn)儀中，并輕輕混合直至溶解。校準(zhǔn)器現(xiàn)在的濃度為18.40µg/mL（重新配制的校準(zhǔn)器應(yīng)為如果打算將來使用，則立即冷凍）。需要準(zhǔn)備人乳鐵蛋白校準(zhǔn)品使用前立即（見下表）。在每一步之間充分混合。避免起泡。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA試劑盒化驗規(guī)程：

樣品的稀釋：

由于測定的高靈敏度，在用于正常測定之前，應(yīng)稀釋每個樣品。A 1:20血清或血漿稀釋適用于大多數(shù)樣本，而母乳樣本可能需要稀釋1:50000。

對于產(chǎn)生校準(zhǔn)曲線范圍外結(jié)果的樣品的絕對定量，取較小值或較大值可能需要稀釋。如果不確定樣品水平，則在之前用一個或兩個代表性樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋強烈建議運行整個板。

為了制備1:20稀釋的樣品，將20µL樣品轉(zhuǎn)移到380µL 1X稀釋劑中。這樣可以得到1:20的稀釋度?；旌戏浅橹苽?span style="font-family: Calibri;">1:50000稀釋的樣品，將5µL樣品轉(zhuǎn)移至495µL 1X稀釋劑中。這給你一個1： 100稀釋。充分混合。然后，將2µL的1X稀釋劑轉(zhuǎn)移至998µL，稀釋1:100的樣品。對樣品進(jìn)行1:50000稀釋。在每個階段充分混合。