細胞衰老被認為是一種抑制腫瘤的機制和機體衰老的根本原因。衰老代表一種停滯狀態(tài)，在這種狀態(tài)下，細胞仍能存活，但不受血清或培養(yǎng)傳代的刺激而分裂。

細胞衰老檢測試劑盒（β-半乳糖苷酶法）提供一種簡單便捷的操作方法，對衰老細胞或組織進行染色檢測；本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞和組織切片的衰老檢測，但僅染色衰老細胞，不會染色衰老前的細胞(presenescent cells)、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞(immortal cells)或腫瘤細胞。

艾美捷Biogradetech 細胞衰老檢測試劑盒（β-半乳糖苷酶法）

中文名稱：細胞衰老檢測試劑盒（β-半乳糖苷酶法）

英文名字：Senescence β-Galactosidase Staining Kit

Biogradetech貨號：D-AKE3030-100T

規(guī)格：100T

應(yīng)用：細胞分析

保存建議：請將未開封使用的保存于2-38℃；啟用后的試劑盒，請參考說明書保存各個組分。

Biogradetech 細胞衰老檢測試劑盒（β-半乳糖苷酶法）檢測方法：

以下方案指-定用于FACS實驗。如果使用較大的盤子，則相應(yīng)地增加數(shù)量和體積

1.細胞培養(yǎng)：對于懸浮細胞：離心細胞（700 x g，4°C、 10分鐘）并取出介質(zhì)。將細胞沉淀重新懸浮在500µl新鮮介質(zhì)（~106個細胞/ml）中，并將其轉(zhuǎn)移到24孔板中。如果需要，用感興趣的化合物在37°C/5%CO2下處理細胞48小時。對于粘附細胞：將細胞（約5x105個細胞/孔）播種在24孔板中，并孵育過夜。培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)基，如果需要，加入含有感興趣化合物的新鮮培養(yǎng)基，并在37°C/5%CO2下處理48小時。對于對照細胞：我們建議單獨用載體處理細胞。

2.細胞染色：對于懸浮細胞：處理后，將細胞收集在無菌Eppendorf管中，離心（700 x g，4C、 10分鐘）收集細胞顆粒并除去培養(yǎng)基。在500中重新懸浮細胞顆粒含有1.5µl衰老染料pertube的新鮮培養(yǎng)基。在37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2小時。用500洗滌2Xml洗滌緩沖液。在500個細胞中復(fù)蘇細胞清洗緩沖液并立即使用流式細胞儀進行分析。對于粘附細胞：取出培養(yǎng)基，加入每500含有1.5µl衰老染料的新鮮培養(yǎng)基ml媒體。在37°C、5%二氧化碳條件下培養(yǎng)1-2小時。孵育后，用500洗滌細胞2倍洗滌緩沖液。通過胰蛋白酶消化收集細胞，用500µ洗滌1次，然后將細胞重懸于500沖洗緩沖液，立即用流式細胞儀進行分析。

3.FACS：應(yīng)在FL1通道中測量信號。為了確保只有合適的靶細胞被選通，使用側(cè)散射與FL-1圖。我們建議將未染色的對照細胞（即無染料染色）懸浮在洗滌緩沖液中，以建立流式細胞儀。

3T3細胞在24孔中以每孔5x105個細胞鋪板，在37°C/5%CO2的完-全細胞培養(yǎng)基中處理4小時（分別用和不用200nM柔紅霉素；測試和對照反應(yīng)）48小時。取出培養(yǎng)基，用含有衰老染料的培養(yǎng)基代替，并在37°C/5%CO2下孵育2小時。孵育時間后，用WashBuffer洗滌細胞2次，將細胞胰蛋白酶化，用Wash Buffer洗滌一次，并通過FACS分析。