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細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒(β-半乳糖苷酶法)檢測(cè)方法

時(shí)間:2023/8/4閱讀:180
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細(xì)胞衰老被認(rèn)為是一種抑制腫瘤的機(jī)制和機(jī)體衰老的根本原因。衰老代表一種停滯狀態(tài),在這種狀態(tài)下,細(xì)胞仍能存活,但不受血清或培養(yǎng)傳代的刺激而分裂。

 

細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒(β-半乳糖苷酶法)提供一種簡(jiǎn)單便捷的操作方法,對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè);本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片的衰老檢測(cè),但僅染色衰老細(xì)胞,不會(huì)染色衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞。

 

艾美捷Biogradetech 細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒(β-半乳糖苷酶法)

中文名稱(chēng):細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒(β-半乳糖苷酶法)

英文名字:Senescence β-Galactosidase Staining Kit

Biogradetech貨號(hào):D-AKE3030-100T

規(guī)格:100T

應(yīng)用:細(xì)胞分析

保存建議:請(qǐng)將未開(kāi)封使用的保存于2-38℃;啟用后的試劑盒,請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)保存各個(gè)組分。

 

Biogradetech 細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒(β-半乳糖苷酶法)檢測(cè)方法:

以下方案指-定用于FACS實(shí)驗(yàn)。如果使用較大的盤(pán)子,則相應(yīng)地增加數(shù)量和體積

1.細(xì)胞培養(yǎng):對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心細(xì)胞(700 x g,4°C、 10分鐘)并取出介質(zhì)。將細(xì)胞沉淀重新懸浮在500µl新鮮介質(zhì)(~106個(gè)細(xì)胞/ml)中,并將其轉(zhuǎn)移到24孔板中。如果需要,用感興趣的化合物在37°C/5%CO2下處理細(xì)胞48小時(shí)。對(duì)于粘附細(xì)胞:將細(xì)胞(約5x105個(gè)細(xì)胞/孔)播種在24孔板中,并孵育過(guò)夜。培養(yǎng)后,取出培養(yǎng)基,如果需要,加入含有感興趣化合物的新鮮培養(yǎng)基,并在37°C/5%CO2下處理48小時(shí)。對(duì)于對(duì)照細(xì)胞:我們建議單獨(dú)用載體處理細(xì)胞。

2.細(xì)胞染色:對(duì)于懸浮細(xì)胞:處理后,將細(xì)胞收集在無(wú)菌Eppendorf管中,離心(700 x g,4C、 10分鐘)收集細(xì)胞顆粒并除去培養(yǎng)基。在500中重新懸浮細(xì)胞顆粒含有1.5µl衰老染料pertube的新鮮培養(yǎng)基。在37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2小時(shí)。用500洗滌2Xml洗滌緩沖液。在500個(gè)細(xì)胞中復(fù)蘇細(xì)胞清洗緩沖液并立即使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。對(duì)于粘附細(xì)胞:取出培養(yǎng)基,加入每500含有1.5µl衰老染料的新鮮培養(yǎng)基ml媒體。在37°C、5%二氧化碳條件下培養(yǎng)1-2小時(shí)。孵育后,用500洗滌細(xì)胞2倍洗滌緩沖液。通過(guò)胰蛋白酶消化收集細(xì)胞,用500µ洗滌1次,然后將細(xì)胞重懸于500沖洗緩沖液,立即用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

3.FACS:應(yīng)在FL1通道中測(cè)量信號(hào)。為了確保只有合適的靶細(xì)胞被選通,使用側(cè)散射與FL-1圖。我們建議將未染色的對(duì)照細(xì)胞(即無(wú)染料染色)懸浮在洗滌緩沖液中,以建立流式細(xì)胞儀。

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3T3細(xì)胞在24孔中以每孔5x105個(gè)細(xì)胞鋪板,在37°C/5%CO2的完-全細(xì)胞培養(yǎng)基中處理4小時(shí)(分別用和不用200nM柔紅霉素;測(cè)試和對(duì)照反應(yīng))48小時(shí)。取出培養(yǎng)基,用含有衰老染料的培養(yǎng)基代替,并在37°C/5%CO2下孵育2小時(shí)。孵育時(shí)間后,用WashBuffer洗滌細(xì)胞2次,將細(xì)胞胰蛋白酶化,用Wash Buffer洗滌一次,并通過(guò)FACS分析。


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