FlyCut™ 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 FlyCut™ 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne™ 或 CutOne™ Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。此外，百時(shí)美去磷酸化、連接試劑在 CutOne™ Buffer 中均具有活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗(yàn)。CutOne™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。CutOne™ Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

艾美捷快速內(nèi)切酶DpnII：

Cat #: C-BSM533

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

快速內(nèi)切酶DpnII組分：

推薦反應(yīng)條件

1xCutOne“”緩沖區(qū)；37°C培養(yǎng)；有關(guān)反應(yīng)設(shè)置，請(qǐng)參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制

功能測(cè)試

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育15分鐘，反應(yīng)20μl，瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定完-全消化。

長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)/星形活性測(cè)定

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”緩沖液中，在37°C下孵育3小時(shí)，進(jìn)行20μl反應(yīng)，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定，產(chǎn)生無(wú)可檢測(cè)核酸酶降解的DNA模式。較長(zhǎng)的孵化時(shí)間可能導(dǎo)致恒星活動(dòng)。

結(jié)扎和清算

在37℃下用FlyCut“”Dpnll消化10倍后，>95%的DNA片段可以與22°C的T4 DNA配體連接。在這些連接的片段中，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定，>95%可以用FlyCut“Dpnll重新切割。

非特異性核酸內(nèi)切酶活性

在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”緩沖液中進(jìn)行20μl反應(yīng)，在37°C下孵育4小時(shí)，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定，轉(zhuǎn)化為刻痕或線性形式的轉(zhuǎn)化率<10%。

在推薦的反應(yīng)條件下，該酶可在5~15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的最適反應(yīng)溫度為37°C。

當(dāng)?shù)孜?span style="font-family: Calibri;">DNA被DAM甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

當(dāng)?shù)孜?span style="font-family: Calibri;">DNA被EcoBI甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶在80°C下保溫20分鐘即可熱滅活，保溫3小時(shí)不顯示星形活性，但保溫時(shí)間較長(zhǎng)可能會(huì)產(chǎn)生星形活性。