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武漢艾美捷科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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快速內(nèi)切酶EcoRI/ C-BSM536解決方案

時(shí)間:2023/9/11閱讀:135
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FlyCut™ 酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut™酶在通用CutOne中顯示出優(yōu)異的活性™ 和CutOne™ 彩色緩沖液,能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)工作,并消除了連續(xù)消化的需要。FlyCut™ 酶已通過多項(xiàng)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne™ Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料,可以將反應(yīng)混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料™ 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移,黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

 

艾美捷快速內(nèi)切酶EcoRI

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

 

快速內(nèi)切酶EcoRI組分:

31.png

推薦反應(yīng)條件

1x CutOne“"緩沖器;在37°C下培養(yǎng);有關(guān)反應(yīng)設(shè)置,請(qǐng)參閱“快速DNA消化方案"。

熱滅活

80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制

功能測(cè)試

在含有1μgλDNA1μl FlyCutEcoRICutOne“緩沖液中,在37°C下孵育15分鐘,20μl反應(yīng)可通過瓊脂糖凝膠電泳確定完-全消化。

長時(shí)間培養(yǎng)/星形活性測(cè)定

在含有1μgλDNA1μl FlyCutEcoRICutOne"緩沖液中,在37℃下孵育3小時(shí),反應(yīng)20μl,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到DNA模式?jīng)]有可檢測(cè)的核酸酶降解。長期孵育可能導(dǎo)致星形活性。

結(jié)扎和清算

FlyCut’“EcoRl37℃下消化10倍后,在22℃下可將>95%DNA片段與T4 DNA連接物連接。瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定,在這些連接的片段中,>95%的片段可用FlyCut"EcoRI重切。

非特異性核酸內(nèi)切酶活性

在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl FlyCut’’EcoRICutOne“緩沖液中,在37℃下孵育4小時(shí),20μl反應(yīng)可使瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定的刻痕或線性化形式的轉(zhuǎn)化率<10%

 

藍(lán)/白篩選試驗(yàn)

1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合適載體™ EcoRI。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。在含有X-GalIPTG和適當(dāng)抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上,成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達(dá)并產(chǎn)生藍(lán)色菌落,而中斷基因(即降解的DNA末端)產(chǎn)生白色菌落。FlyCut™ 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

 

在推薦的反應(yīng)條件下,該酶可在5~15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的最適反應(yīng)溫度為37°C。

當(dāng)?shù)孜?span style="font-family: Calibri;">DNACpG甲基化酶甲基化時(shí),這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

當(dāng)?shù)孜?span style="font-family: Calibri;">DNAEcoBI甲基化酶甲基化時(shí),這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶在80°C下保溫20分鐘即可熱滅活,保溫3小時(shí)不顯示星形活性,但保溫時(shí)間較長可能會(huì)產(chǎn)生星形活性。


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