大腸桿菌拓撲異構(gòu)酶IV（top4）是一種II型拓撲異異構(gòu)酶，由大腸桿菌中的parC和parE兩個基因編碼。這種酶對大腸桿菌的脫鏈和染色體分離至關重要；因此，拓撲IV傾向于更喜歡分子間鏈傳遞（鏈式和脫鏈反應）而不是弛豫反應。EC拓撲異構(gòu)酶IV也是喹諾酮類抗菌劑的靶標，喹諾酮類抗菌藥通過將酶轉(zhuǎn)化為DNA損傷劑來發(fā)揮作用。TopoGEN提供純化的Top4，用于藥物開發(fā)和篩選分析的各個方面。該酶在解鏈動基質(zhì)DNA（kDNA）中非?；钴S，但也會松弛超螺旋質(zhì)粒DNA。然而，它在放松活動中不太穩(wěn)健。根據(jù)Peng和Marians的方法純化大腸桿菌拓撲異構(gòu)酶IV。

艾美捷TopoGEN大腸桿菌拓撲異構(gòu)酶IV：

編號：TG2000EC

分類：拓撲酶

標簽：拓撲異構(gòu)酶

包含材料：包含兩部分的測定緩沖液和稀釋緩沖液。

EC拓撲酶IV在干冰上運輸，應儲存在-70°C。我們還建議在s次解凍后分裝酶。請注意，反復的凍融會導致活性損失。

拓撲異構(gòu)酶IV質(zhì)量控制測試：

Top4通過已發(fā)表的方法（2）過表達并純化。每個亞基在SDS-PAGE上通過CB染色檢測到單一條帶。通過在優(yōu)化的I型活性條件下對超螺旋DNA的松弛進行測定，評估了與拓撲異構(gòu)酶I的交叉污染。在這些條件下，與pBR322孵育2小時后，未檢測到任何松弛產(chǎn)物。

拓撲異構(gòu)酶IV解鏈測定，EC拓撲酶IV，top4解鏈測定

拓撲異構(gòu)酶IV測定條件

反應包含以下成分（20微升）：40 mM Tris-HCl（pH 7.5），6 mM MgCl2，10 mM DDT，100 mM 鉀谷氨酸，40 uM ATP，50 ug BSA/ml，0.2 ug kDNA。反應在37°C下進行30分鐘后，用SDS（1%）終止，隨后用蛋白酶K消化（50 ug/ml，56°C下15分鐘）。反應產(chǎn)物在含有0.5 ug/ml乙酰胺的1%瓊脂糖凝膠上電泳（用手持紫外線燈監(jiān)測以分辨解鏈產(chǎn)物），用蒸餾水脫色（室溫下20分鐘）并拍照。

TopoGEN大腸桿菌拓撲異構(gòu)酶IV評論和引用：

Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S, Wiltsie J, Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, de la Cruz M, Martin J, Vicente F, Genilloud O, Lu J, Painter RE, Young K, Overbye K, Donald RGK, Singh SB: Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II Topoisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Profiling in Staphylococcus aureus.  Cell Chemistry and Biology 2011, 18: 955-965.  doi: 10.1016/j.chembiol.2011.06.011.

Peng, H., and Marians, K. (1999). DNA Topoisomerase Protocols Volume I; page 163.

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