鈣黃綠素 AM 是一種能滲透細胞的染料，可用于測定大多數(shù)真核細胞的活力。 在活細胞中，細胞內(nèi)的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非熒光的鈣黃綠素 AM 轉(zhuǎn)化為綠色熒光鈣黃綠素。

艾美捷超級純鈣黃綠素,AM：

貨號：AAT-22003

等級：超純

分子量：994.86

溶劑：DMSO（二甲基亞砜）

消光系數(shù)（cm -1 M -1）：81000

激發(fā)（納米）：501

發(fā)射（納米）：521

H-短語：H303, H313, H333

危險符號：XN

預(yù)期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語：R20, R21, R22

儲存：冷凍（< -15 °C）；盡量減少光照暴露

激發(fā)：488 納米激光

發(fā)射：530, 30 納米濾光片

儀器規(guī)格(S)：FITC通道

激發(fā)：490

發(fā)射：525

截止：515

推薦板：黑色壁，透明底

儀器規(guī)格(S)：底部讀取模式

激發(fā)和發(fā)射

Calcein-AM是一種非熒光化合物，分子量為994.86道爾頓。它被非特異性的細胞內(nèi)酯酶水解成calcein。Calcein是一種熒光化合物，激發(fā)峰值為501納米，發(fā)射峰值為521納米。在流式細胞儀中，可以用488納米激光激發(fā)并在FITC通道讀取。在熒光板讀數(shù)器中，可以使用Ex/Em = 490/525納米的設(shè)置，并在515納米處設(shè)置截止濾光片。

毒性

Calcein AM的安全數(shù)據(jù)表指出，它是一種非危險化學(xué)品或混合物。在生命科學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)研究中，由于其相對較低的細胞毒性，calcein AM通常用于研究酶活性、細胞活力、膜完整性和長期細胞追蹤。然而，對于特定的細胞系和實驗條件，高濃度的calcein AM顯示出對細胞的毒性。

Calcein AM能否固定？

簡單地說，不，calcein AM是不可固定的。無論使用何種固定方法——醛類或甲醇固定——用calcein AM染色的細胞都會失去它們的染色模式。此外，calcein AM不能用于固定細胞，因為它們?nèi)狈?span style="font-family: Calibri;">calcein AM轉(zhuǎn)化為calcein所需的酯酶和保留染料所需的膜完整性。Calcein AM是一種熒光原酯酶底物，只能用于活細胞以確定細胞活力。

Calcein AM能染色細菌嗎？

Calcein AM染色不僅適用于真核樣本，還可用于確定細菌樣本的細胞活力。Calcein AM適用于檢測許多活的革蘭氏陰性細菌菌株，可用于微生物學(xué)研究、環(huán)境監(jiān)測、藥品無菌性測試和食品及植物評估技術(shù)。與真核細胞一樣，細菌在其細胞質(zhì)中含有微生物酯酶，可以裂解calcein AM的疏水阻斷基團，并將它們轉(zhuǎn)化為熒光的calcein。信號可以使用熒光儀器測量，其強度與存在的活細菌數(shù)量成正比。

如何配制calcein溶液？

Calcein及其衍生物calcein AM通常作為凍干固體供應(yīng)，必須在加載到細胞之前在溶液中重懸，通常是DMSO。要配制calcein或calcein AM的庫存溶液，請在高質(zhì)量的無水DMSO中重懸染料，使?jié)舛却蠹s為1毫克/毫升。例如，向50微克的calcein AM中加入50微升的DMSO將得到1毫克/毫升的庫存溶液。

對于calcein AM，需要將庫存溶液進一步稀釋到水性緩沖液中（例如，HBSS），然后才能加載到細胞中。作為水性溶液，calcein AM容易水解，應(yīng)在一天內(nèi)使用。

什么是calcein AM的陽性和陰性對照？

陽性對照：這是一群在正常培養(yǎng)環(huán)境中生長的健康、未經(jīng)處理的細胞。健康、未經(jīng)處理的細胞含有水解calcein AM成熒光產(chǎn)物的細胞內(nèi)酯酶和保留染料的完整質(zhì)膜。用calcein AM染色陽性對照將導(dǎo)致細胞在藍光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。

陰性對照：這是一群死亡細胞，通常用乙醇或甲醛固定。死亡細胞不含有細胞內(nèi)酯酶，因此無法將非熒光的calcein AM底物轉(zhuǎn)化為熒光的calcein產(chǎn)物。用calcein AM染色的陰性對照不會產(chǎn)生熒光信號。

在進行calcein AM細胞活力測定時，執(zhí)行目標樣本時，擁有適當?shù)年栃院完幮詫φ辗浅Ｖ匾?，以便跟蹤報告結(jié)果的變化和相似性。所有對照應(yīng)來自與目標樣本相同的培養(yǎng)。

Calcein AM能染色死亡或壞死的細胞嗎？

不，calcein AM不染色死亡或壞死的細胞，因為它們?nèi)狈⒎菬晒獾?span style="font-family: Calibri;">calcein AM轉(zhuǎn)化為熒光calcein所需的酶（例如，非特異性細胞內(nèi)酯酶）。

Calcein AM染色協(xié)議

簡要總結(jié)

準備庫存溶液（2至5毫摩爾）

準備工作溶液（1至10微摩爾）

準備細胞成像

去除細胞培養(yǎng)基并洗滌細胞

將工作溶液加入培養(yǎng)中

在37°C下孵化（30至60分鐘）

替換工作溶液以去除多余的探針