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技術文章

平尾毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素

閱讀:191          發(fā)布時間:2022-3-29

平尾毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

人集聚蛋白(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human AGRN (Agrin) ELISA Kit

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人周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human CDKN3 (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 3) ELISA Kit

人血管抑素(ANG)酶聯免疫吸附測定試劑盒  Human ANG (Angiostatin) ELISA Kit

人血管緊張素II (Ang-II)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human Ang-II (Angiotensin II) ELISA Kit

人血管緊張素I(Ang-I)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human Ang-I (Angiotensin I) ELISA Kit

人血管緊張素II受體1(ANG II R1)酶聯免疫吸附測定試劑盒  Human ANG II R1/AGTR1 (Angiotensin II Receptor 1) ELISA Kit 

人血管緊張素II受體1抗體(ANGⅡR1-Ab)酶聯免疫吸附測定試劑盒  Human ANG II R1-Ab (Angiotensin II Receptor 1 Antibody) ELISA Kit 

人血管緊張素II受體2(ANGⅡR2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human ANG II R2/AGTR2 (Angiotensin II Receptor 2) ELISA Kit 


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