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激光共聚焦顯微鏡的定義及優(yōu)點

時間:2023/3/14閱讀:2143
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激光共聚焦顯微鏡和掃描電鏡都是點源逐點掃描成像,通過控制掃描驅(qū)動范圍,調(diào)節(jié)放大倍數(shù)。激光共聚焦顯微鏡是通過激光掃描的方式工作,可以獲得三維圖像。掃描電鏡是利用細聚焦電子束在樣品表面掃描時激發(fā)出來的各種物理信號來調(diào)制成像的,只能得到二維圖像,不能得到三維圖像。
激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光點倍增管或冷電耦器件逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。
 照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
優(yōu)點:
1、以激光為光源,在相應(yīng)的熒光探針標記后,對樣本進行逐點掃描,逐層獲得二維光學橫斷面圖像,具有“細胞CT”的功能,并可通過計算機三維重建軟件支持,獲得三維圖像,并可以任意角度旋轉(zhuǎn),觀察細胞,組織立體形態(tài)和空間關(guān)系;
2、可對細胞膜的流動性,細胞間通訊,細胞融合,細胞骨架彈性測量等,這一技術(shù)可以對活細胞和組織進行原位動態(tài)定量的觀察和測量。
3、可以對活細胞和組織進行無損傷的觀察,動態(tài)測量細胞內(nèi)的Ca離子濃度和pH值等活細胞生理信息。 

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