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技術(shù)文章

原代培養(yǎng)技術(shù)的重點關(guān)注事項

閱讀:155          發(fā)布時間:2024-1-8

     原代培養(yǎng):字面意思即第1次培養(yǎng),但實際上,通常把第1代至第10代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。 原代培養(yǎng)技術(shù)的重點關(guān)注事項:

一、注意污染

1、嚴(yán)格進(jìn)行動物皮膚消毒,使用三套器械取材。新生動物皮膚先用2%碘酒液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。
2、嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作,防止細(xì)菌、霉菌、支原體污染,避免化學(xué)物質(zhì)污染。自取材開始,保持所有組織細(xì)胞處于無菌條件。細(xì)胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。
3、吸取液體前,瓶口和吸管進(jìn)行火焰消毒;吸取液體時,避免瓶口和吸管碰撞。
4、離心管入臺前,管口、管壁應(yīng)消毒。
5、實驗者離開超凈臺時,要隨時用肘部關(guān)閉工作窗。
6、使用過的器械用酒精棉球擦去血污后,移入另一個器皿中繼續(xù)消毒,在浸泡器械時剪刀口要叉開放,鑷子彎頭要向下放,并加蓋消毒。凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞,以防止細(xì)菌落入。
二、器材使用時既要注意用火焰消毒,又要防止?fàn)C傷、燙死細(xì)胞。經(jīng)火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷卻。
三、超凈臺內(nèi)溫度、濕度較大,在夏天工作時臺內(nèi)散熱更慢,因此進(jìn)行細(xì)胞懸液混勻、接種時,離火焰要稍微遠(yuǎn)些,組織細(xì)胞、培養(yǎng)液等不能暴露過久,以免溶液蒸發(fā)。


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