使用方法
樣品染色：
1. 離心收集懸浮細胞。離心機300×g -500×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。（300×g -400×g，2-8°C，離心時間5分鐘收集細胞）。
3. 用100 μl 1X Annexin V結合液懸浮細胞，濃度大約為1-5 X 106 cells/ml。
4. 在細胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-APC染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育5-15分鐘。
5. 加入PI（或7-AAD）染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育1-3分鐘。（此步驟選做，根據實驗需要也可以只做APC單染）。
6. 加入400 μl PBS或1X Annexin V結合液，輕輕混勻。
7. 立即用流式細胞儀檢測。
流式細胞儀分析：
經處理過的細胞此時可以在流式細胞儀上分析。
按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-APC的熒光激發(fā)波長652 m，發(fā)射波長670 m；PI熒光激發(fā)波長535 m，發(fā)射波長在620 m。
上機檢測前，須用待測細胞制備質控樣本來設定流式細胞儀的熒光補償和設置十字門的范圍：
（I） 未轉染GFP等標記的細胞
① 空白管：陰性對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調節(jié)電壓。
② 單染管：有明顯凋亡的細胞，只加Annexin V/APC染色。用于調節(jié)補償。
③ 單染管：有明顯凋亡的細胞，只加PI染色。用于調節(jié)補償
④ 檢測管：待測的處理細胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數據。
（II） 轉染GFP細胞
① 未轉染空白管：未轉染細胞，陰性對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調節(jié)電壓。
② 轉染GFP空白管：轉染GFP的對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調補償
③ 未轉染單染管：未轉染且有明顯凋亡的細胞，只加Annexin V/APC染色。用于調節(jié)補償。
④ 未轉染單染管：未轉染且有明顯凋亡的細胞，只加PI染色。用于調節(jié)補償
⑤ 檢測管：待測的處理細胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數據。
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