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細(xì)胞培養(yǎng)化學(xué)性污染的來源、危害及預(yù)防

2021-8-27 閱讀(465)

 

培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞的污染。化學(xué)物質(zhì)并不總是抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。不同細(xì)胞對(duì)化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長(zhǎng)輔助因子及儲(chǔ)存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分,如氨基酸,若濃度超過了合適的范圍,也會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。同樣,不同細(xì)胞系其最佳培養(yǎng)條件下對(duì)血清和緩沖液的要求是不一樣的,在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是最常見的化學(xué)性污染。

 水:水是在凝固時(shí)膨脹的化合物。因此在選擇凍存細(xì)胞的容器時(shí)應(yīng)考慮到這個(gè)因素。容器因水的膨脹而發(fā)生破裂是引起試劑污染的重要原因。為了避免金屬離子、有機(jī)分子、細(xì)胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對(duì)水的污染,在配制液體,清洗容器時(shí)必須使用不含雜質(zhì)的超純水。需要注意的是,超純水放置過久其純度會(huì)下降。

  在高壓蒸氣滅菌及蒸餾水時(shí)水經(jīng)常被污染,因?yàn)楦邏赫魵忮伡凹兯畽C(jī)的常規(guī)維護(hù)后可能有少量的化學(xué)物質(zhì)殘留。為了保證水的純度,我們應(yīng)采取措施盡量避免化學(xué)物質(zhì)的殘留。

 血清: 動(dòng)物血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個(gè)動(dòng)物,而且不同廠商的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量各不相同,因此血清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對(duì)不同細(xì)胞的促生長(zhǎng)能力及毒副作用取決于這些細(xì)胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)時(shí),為了保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性,最好選用同一批次的血清。

培養(yǎng)液:培養(yǎng)附加成分、試劑 培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,并經(jīng)過機(jī)構(gòu)的鑒定,實(shí)驗(yàn)者本人也應(yīng)對(duì)上述成分進(jìn)行純度鑒定。同時(shí),正確配置和儲(chǔ)存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的,應(yīng)該采取標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,避免液體體積計(jì)算錯(cuò)誤,混用類似化合物等錯(cuò)誤。

 培養(yǎng)器皿及容器: 細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)使用到各種不同的培養(yǎng)器皿及容器。培養(yǎng)器皿的大小,構(gòu)形設(shè)計(jì)可能會(huì)影響到培養(yǎng)中氣體交換、濕度、培養(yǎng)液的pH值和細(xì)胞生長(zhǎng)密度。培養(yǎng)器皿的工藝及滅菌過程中的差異可能對(duì)培養(yǎng)體系產(chǎn)生影響。塑料制品在生產(chǎn)過程中可能殘留一些有毒成形劑,生產(chǎn)工藝的不同可能引起器皿表面附著能力的不同。儲(chǔ)存不同物質(zhì)時(shí)應(yīng)選用合適的塑料或玻璃容器,因?yàn)榫凭?、?qiáng)酸、強(qiáng)堿能夠溶解塑料或玻璃的某些成分。

 



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