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上海吉至生化科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
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2021-11-19 閱讀(300)
實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸鹽緩沖液中，并計(jì)算溶解的毫摩爾數(shù)。如果蛋白含有不恰當(dāng)?shù)木彌_液（如Tris或者甘氨酸），可以通過(guò)在PBS中透析或濃縮的方法除去。計(jì)算：蛋白質(zhì)量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白質(zhì)的毫摩爾數(shù)。
2. 在打開(kāi)之前，平衡生物素至室溫。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超純水中，加入足夠量濃度的生物素，一般對(duì)于10 mg/ml 蛋白來(lái)說(shuō)超過(guò)12倍分子數(shù)，對(duì)于2 mg/ml 蛋白溶液應(yīng)超過(guò)20倍，或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室溫30分鐘，或冰上放置2小時(shí)。
4. 用30 ml PBS預(yù)洗純化柱，上樣，加入與欲收集量相同的緩沖液，收集0.5 ml 或1 ml 于單獨(dú)的管中。
5. 以280 nm 的吸收值測(cè)定蛋白含量。
6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入疊氮鈉、甘油等保存。
