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MTT比色法檢測細(xì)胞活性操作步驟(背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)為例)

2023-7-24 閱讀(220)

無菌條件下取新生一天的SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)。
鏡下去除神經(jīng)根和外膜,放入1ml 0.1%膠原酶中37℃消化30min,每5min搖勻一次。
洗去膠原酶,吹打分散后,接種于預(yù)先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中,每孔含100μl無血清L15培養(yǎng)基,細(xì)胞約800個。
實(shí)驗(yàn)組分別加入純化的表達(dá)蛋白(分別以不同的蛋白濃度),陰性對照加入等體積表達(dá)蛋白的溶劑。
37℃ 5%CO2培養(yǎng)48hr后,每孔加入10μl MTT,37℃ 5%CO2孵育4hr。
加入100μl 20%的SDS處理液,37℃孵育20hr。
用EL×800微孔酶標(biāo)儀測定OD570值,數(shù)據(jù)分析。




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