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一，重組C因子法原理
PyroGene™重組因子C試劑盒是一種不含動物制品的LAL替代方案，F(xiàn)DA已許可將其作為一種替代方法。它基于一種重組產(chǎn)生的C因子(rFC)，C因子是馬蹄蟹凝血級聯(lián)反應(yīng)中的第一個組成部分。 它由內(nèi)毒素結(jié)合激活。然后，產(chǎn)生的活性成分發(fā)揮作用，裂解合成底物，釋放熒光。反應(yīng)在96孔板中操作，使用380/440nm的激發(fā)/發(fā)射波長，在時間零點和一小時孵育后，在熒光酶標儀中以37°C ± 1°C孵育的時間零點和一小時后，分別測量熒光。
比較細菌內(nèi)毒素檢測試劑盒中的擴增方法
對一小時讀數(shù)和零時讀數(shù)之間的差 (?RFU)進行校正，用于陰性對照 ?RFU熒光。凈熒光的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)成正比，并且在0.005-5.0 EU/ml范圍內(nèi)呈線性。樣品中內(nèi)毒素的計算與標準曲線有關(guān)。
三，重組C因子法檢測所需主要設(shè)備、材料
試劑
– rFC酶溶液
– 熒光底物
– rFC定緩沖液
– 內(nèi)毒素工作標準品 (CSE)
– LAL 試劑檢查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)
器具
– 玻璃稀釋管(# N207)
– 獨立包裝的血清吸管（選購）
– 標簽
– 96-微孔板 (# 25-340)
– 試劑槽(# 00190035)
請使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具。
設(shè)備和軟件
– 八道移液器
– 孵育熒光酶標儀
– WinKQCL™軟件
– 移液器
– 計時器
– 漩渦混合器
三，操作步驟
注意事項
– 使用匹配的試劑
– 使用玻璃管制作內(nèi)毒素稀釋液[不推薦使用塑料管]
– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議
– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具
– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同
– 不要旋轉(zhuǎn)工作試劑
– 將試劑放入96-微孔板的孔中時，避免產(chǎn)生氣泡
– 不要污染樣品、標準品、LRW 和器具
– 應(yīng)正確安裝、驗證并維護設(shè)備儀器
瑋馳相關(guān)產(chǎn)品
設(shè)備和軟件
| 品牌 | 貨號 | 說明 |
| Lonza | 25-345S | PyroWave™ XM熒光酶標儀 |
| Lonza | 25-611 | 符合FDA PART 11認證的軟件WinKQCL, 也包含一個儀器許可證 |
重組因子C終點熒光試劑盒
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 靈敏度(EU/ml) |
| Lonza | 50-658U | PyroGene™ 重組因子C終點熒光試劑盒 | 192次測試 | 0.005至5 |
| Lonza | 50-658NV | PyroGene™ 重組因子C終點熒光試劑盒 | 2880次測試 | 0.005至5 |
無熱原試管
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | N207 | 無熱原試管 | 30/鋁箔包 |
| Lonza | N201 | 無熱原試管 | 50/箱 |
| Lonza | N205 | 無熱原試管 | 50/鋁箔包 |
無熱原96孔板
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | 25-340 | 無熱原96孔板 | 內(nèi)毒素測試<0.0005EU/孔，50/箱 |
試劑槽
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | 190035 | LAL試劑槽 | <0.005EU/ml，10/包 |
無熱原吸頭
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| Lonza | BE25-415 | Eppendorf® 2-200μl Biopur™ 移液管吸頭 | <0.001 EU/mL，5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤 |
| Lonza | BE25-417 | Eppendorf® 50-1000μl Biopur™ 移液管吸頭 | <0.001 EU/mL，5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤 |
