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細胞培養(yǎng)不再難:貼壁細胞培養(yǎng)技巧全攻略!

2024-4-8  閱讀(200)

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細胞生長特性分為兩種,一種是貼壁一種是懸浮,不同的細胞形態(tài)對應(yīng)的操作方法也大有不同,今天我們主要講解一下貼壁細胞的相關(guān)培養(yǎng)技巧。

在操作貼壁細胞的過程中,消化環(huán)節(jié)確實至關(guān)重要。消化時間的長短需要根據(jù)每個細胞的狀態(tài)進行精確調(diào)整,以確保細胞的健康和完整性。消化過度或消化不充分都可能對細胞造成不可逆的影響,因此,了解并準確判斷貼壁細胞的狀態(tài)對于確定消化時間至關(guān)重要。

貼壁細胞狀態(tài),分為以下幾種:

1,疏松貼壁細胞

細胞傳代密度控制在80%左右最少不能低于60%,消化時間控制在1-2分鐘左右,傳代后48小時內(nèi)不要動該細胞,讓其慢慢貼壁,需要觀察時也要輕拿輕放。

如果在液體中還存在未貼壁的細胞,可以在下次換液時通過離心收集這些細胞。這樣既能保證細胞的充分利用,又能避免未貼壁細胞對實驗結(jié)果的干擾。

2,容易分化的細胞

需使用較好的血清培養(yǎng),盡量讓細胞生長密度高一些,消化時觀察細胞的形態(tài)變化,變圓后及時終止消化處理。

減少吹打次數(shù),避免不必要的機械損傷;輕柔吹打,避免氣泡產(chǎn)生,細胞呈單個狀態(tài)即可。

3,生長緩慢的細胞

如果細胞突然生長緩慢,需考慮是否是試劑的批次問題,細胞污染等可能性。如果本身細胞生長較慢,需使用較好的血清培養(yǎng),必要時可加大血清濃度(5%-10%左右),傳代時密度需在80%以上,密度太稀傳代會直接影響細胞的生長周期及狀態(tài),傳代比例控制在1:2或1:3。

4,聚團成長的細胞

聚團成長的細胞不容易生長滿,在長到70%-80%左右就可以傳代,消化時觀察細胞的形態(tài)變化,細胞變圓并有少量細胞脫落即可終止消化,較難消化的細胞,可以分次消化,相對增加消化時間。

胰酶作為細胞貼壁工藝中的關(guān)鍵物料之一,酶活性、有無動物源等因素均至關(guān)重要。逐典TryPLUS消化液作為體外重組表達的胰酶類似物,與傳統(tǒng)胰酶的消化動力學(xué)相似,但區(qū)別與傳統(tǒng)胰酶,具有純度高,細胞毒性低,細胞消化溫和等特點,產(chǎn)品無動物源性,無需胰酶抑制劑,稀釋即可進行終止,并且能夠兼容多種細胞培養(yǎng)體系,定能成為您細胞培養(yǎng)工藝中的幫手!

逐典TrypLUS消化液優(yōu)勢

1. DMF備案

2. 非動物來源

3. 室溫貯存,無需胰酶抑制劑,稀釋即可終止

4. 消化溫和,消化后細胞活性高

5. 即開即用,方便快捷




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