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中級(jí)會(huì)員·6年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 技術(shù)文章 > Simoa單分子免疫檢測(cè)技術(shù)原理、工作流程、技術(shù)優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用領(lǐng)域
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分子免疫陣列（single molecule array，Simoa）技術(shù)，是一種將單分子計(jì)數(shù)用于蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物的檢測(cè)方法。該技術(shù)檢測(cè)限可達(dá)飛摩爾（fg/mL）數(shù)量級(jí)，是目前代表性的單分子免疫檢測(cè)技術(shù)。
圖1：Simoa分析儀構(gòu)造
技術(shù)原理
Simoa技術(shù)是基于微陣列芯片的單分子免疫檢測(cè)，是在毫米級(jí)芯片上雕刻（或澆筑）成千上萬(wàn)個(gè)微米級(jí)微井，每個(gè)微井體積約 40 fl 左右，隨后將免疫復(fù)合物磁珠分配于微井中，再借助高分辨率熒光顯微鏡對(duì)熒光點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，依據(jù)泊松分布理論，計(jì)算同時(shí)含珠子與熒光產(chǎn)物孔的數(shù)量/含珠子孔總數(shù)的比值，以此確定測(cè)試樣品中的蛋白質(zhì)濃度。
圖2：SimoA 原理圖
Simoa工作流程
SiMoA通過磁珠酶聯(lián)免疫反應(yīng)與微孔陣列芯片的結(jié)合，實(shí)現(xiàn)單分子蛋白檢測(cè)。其操作流程如下：
圖3：SimoA 工作流程圖
（1）利用表面標(biāo)記有捕獲抗體的磁珠捕獲樣品中的抗原；
（2）使用biotin標(biāo)記的檢測(cè)抗體對(duì)被捕獲的抗原進(jìn)行標(biāo)記；
（3）加入鏈霉親和素—半乳糖苷酶復(fù)合物，與檢測(cè)抗體上的biotin結(jié)合；
（4）將反應(yīng)洗凈后的磁珠與底物混合，加載到含有微孔陣列的檢測(cè)芯片中，利用磁場(chǎng)使磁珠落入與其尺寸匹配的微孔中（3μm左右），加入油相，使得微孔之間物理隔離；
（5）含有半乳糖苷酶的微孔由于酶分子催化底物產(chǎn)生熒光產(chǎn)物；
（6）對(duì)微孔陣列進(jìn)行熒光成像，通過對(duì)發(fā)出熒光信號(hào)的微孔個(gè)數(shù)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線來實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1、靈敏度高
比傳統(tǒng)ELISA靈敏度提高1000倍以上；檢測(cè)下限達(dá)到fg/mL，實(shí)現(xiàn)了超低豐度蛋白的有效檢測(cè)和定量。
2、全自動(dòng)化
試驗(yàn)過程不依賴操作人員，從而保證結(jié)果的重復(fù)性和精準(zhǔn)性。
3、多重檢測(cè)
同時(shí)完成多達(dá)10種目標(biāo)分子的檢測(cè)。
4、高精準(zhǔn)度
實(shí)驗(yàn)結(jié)果的批間變異系數(shù)（CVS）低于10%。
5、高線性范圍
檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍>4個(gè)數(shù)量級(jí)。
6、自主研發(fā)
可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行方案開發(fā)和優(yōu)化，適合科研創(chuàng)新研究。
應(yīng)用領(lǐng)域
1、神經(jīng)性疾病的檢測(cè)
借助單分子免疫檢測(cè)技術(shù)的超高靈敏特性，可充分檢測(cè)出血液樣本中的生物標(biāo)志物水平 ，在神經(jīng)性退行性疾病的診斷中具有重要意義.
2、腫瘤檢測(cè)
用于腫瘤早期診斷及治療后的監(jiān)測(cè)。利用 SimoA 對(duì)前列腺特異性抗原(PSA)進(jìn)行檢測(cè)，2 zmol/L 的檢測(cè)靈敏度使得對(duì)前列腺癌的早期診斷成為可能，并且對(duì)于經(jīng)過放療或者切除前列腺的患者，能夠提前數(shù)月乃至數(shù)年發(fā)現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)，對(duì)于提升患者的生存率具有重要意義。
3、傳染性疾病檢測(cè)
目前主要集中在病原體自身標(biāo)志物及細(xì)胞因子。在針對(duì) SARS-Cov-2檢測(cè)中，利用 SimoA 將血液中 N 蛋白的檢測(cè)靈敏度提高至RT-PCR 的檢測(cè)水平(1 zmol/L)，可作為核酸檢測(cè)的有效補(bǔ)充手段，對(duì)于感染的早期診斷及病情進(jìn)展監(jiān)測(cè)具有重要意義。
參考文獻(xiàn)：
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