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三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用TSQ Quantis 在激素類藥物殘留檢測中的應用
閱讀：1687 發(fā)布時間：2019-8-11摘要： 本文在 Thermo Scientific™ 全新液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜三重四極桿平臺 Thermo Scientific™ TSQ™ 上針對國標 SN/T 2222-2008 中皮質(zhì)激素、SN/T 2677-2010 中雄激素以及臨 床研究中常檢的孕激素和雌激素共計 8 種激素類藥物建立了 快速液質(zhì)檢測方法。8 種激素類藥物在其相應的濃度范圍內(nèi) 線性關(guān)系良好（r2>0.99），LOD 均能滿足國標對激 素類藥物殘留的檢測要求。本方法對激素藥物的殘留檢測及 臨床檢測具有指導意義。
引言 激 素 類 藥 物 主 要 包 括 雄 激 素（Androgens）、 雌 激 素（Estrogens）、 孕 激 素（Progestogens）、 糖 皮 質(zhì) 激 素 （Glucocorticoids）等，因其具有影響動物性別分化，縮短 生長周期，促進毛發(fā)生長及恢復皮膚彈性等作用，常被非法 添加于各種動物源食品及化妝品中。研究表明，兒童性早熟、 婦女子宮癌、卵巢癌等疾病發(fā)病率的上升均與濫用此類藥物 有關(guān)，因此 CEC、歐盟、國標、日本等均對動物源食品中激 素類藥物殘留*作出了嚴格要求。國標SN/T 2222-2008 及 SN/T 2677-2010 也分別對進出口動物源性食品中糖皮質(zhì) 激素類獸藥殘留量及雄性激素類藥物殘留量檢測方法做了相 關(guān)規(guī)定。
激素作為由內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌細胞分泌的內(nèi)源性生物活性物 質(zhì)，在體內(nèi)作為信使傳遞信息，通過調(diào)節(jié)各種組織細胞的代 謝活動從而影響人體的生理活動。雖然激素在人體內(nèi)的含量 很低，但卻對人類健康有很大的影響，缺乏或過多都會引發(fā) 各種疾病。因此，臨床上檢測人體多種激素的含量對于疾病 的診斷具有重大意義。本文針對皮質(zhì)激素、孕激素、雄激素、 雌激素類共 8 種激素類藥物建立了快速液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢 測方法，既可為激素類藥物殘留量測定提供技術(shù)保障，亦可 為激素的臨床檢測提供方法借鑒。
2. 實驗部分
2.1. 儀器與試劑 Thermo Scientific™ Vanquish™ Binary Horizon 超液相 色譜儀
賽默飛Quantis 三重四極桿質(zhì)譜儀
甲醇（色譜純，美國 Thermo Fisher 公司）；實驗用水為 Milli-Q 去離子水；NH4OH（色譜純，SIGMA）
2.2. 化合物信息及溶液配制 2.2.1 8 種激素類化合物及其對應內(nèi)標物信息（見表 1）
2.2.2 取適量激素類化合物標準品混合儲備液，稀釋成濃度 在 0.01 ng/mL - 500 ng/mL 范圍的標準溶液，進液質(zhì)聯(lián)用儀 器分析。
2.3. 色譜條件： 色譜柱：Thermo Scientific™ Accucore™ RP-MS （2.6 µm, 100×2.1 mm）；柱溫：40℃；進樣量：5 µL；流動相：A 為水（含0.05% NH4OH），B 為甲醇，梯度洗 脫程序（見表 2）
2.4. 質(zhì)譜條件： 可加熱電噴霧電離源（HESI），正、負離子切換掃描模式； 掃描方式：SRM；噴霧電壓 (+/-): 3500/2500V；離子傳輸管 溫度：350℃；鞘氣壓力 30 arb；輔助氣壓力 10 arb；離子源溫度：350℃；碰撞氣壓力：2 mTorr；選擇反應監(jiān)測離子 對信息見表 3。
表 3. 8 種化合物及質(zhì)譜采集參數(shù) Table 3 MS/MS parameters of 8 compounds and Internal Standard
3. 實驗結(jié)果與討論
3.1 靈敏度測試 采用上述儀器分析方法，8 種激素類化合物及其內(nèi)標物在 7 分鐘內(nèi)均可獲得良好的色譜峰，圖1 為 8 種激素類化合物 在 LO處的選擇離子流提取圖，各化合物靈敏度測試結(jié)果 見表 4。
3.2 線性范圍測試 采用上述儀器分析方法，對 8 種激素類化合物進行線性范圍 測試，線性相關(guān)系數(shù) r2 均 ≥ 0.99，線性關(guān)系良好。8 種激素 類化合物線性方程及線性相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表 4，選取部分化 合物線性方程圖見圖 2。
3.3. 儀器相對標準偏差 RSD 性能展示 采用上述儀器分析方法，對8 種激素類化合物進行相對標 準偏差測試（n=6）實驗結(jié)果證明8 種化合物相對標準偏差RSD% 均 ≤ 5% 其中，雄烯二酮50 pg/mL (n=6) RSD% 為 3.39%；100 pg/mL (n=6) RSD% 為 1.04%（圖 3）
4. 實驗結(jié)果與討論 本文建立了三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（Quantis）分析8 種激素類藥物的檢測方法。由實驗結(jié)果可以看出，基于Quantis 建立的檢測方法不僅具有優(yōu)異的靈敏度和線性范圍 同時具備優(yōu)異的重現(xiàn)性，本方法可用于激素類藥物的日常分 析檢測。