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重組人GDF3操作步驟不會的看過來

2021-6-8  閱讀(297)

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   重組人GDF3原核表達(dá)在表達(dá)當(dāng)中來說還是比較簡單,細(xì)菌培養(yǎng)條件簡單、生長速度快,需要的儀器和培養(yǎng)基都比較便宜。當(dāng)然,它也存在一些缺乏高級修飾、細(xì)胞內(nèi)部還原性過高等缺點。原核表達(dá)從一開始的設(shè)計就非常重要,所謂好的開始是成功的一半。要根據(jù)是否要求可溶將載體分成兩大類,可以同時嘗試多種表達(dá)系統(tǒng),也有許多商業(yè)化的系統(tǒng)供選擇。
  重組人GDF3操作步驟:
  1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
  2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
  3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
  9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

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