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重組人GDF3影響表達的因素和解決方法

2021-8-5  閱讀(285)

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  細胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導多種細胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應性免疫等多種功能。細胞因子是由多種細胞產(chǎn)生的,具有廣泛調(diào)節(jié)細胞功能作用的多肽分子, 細胞因子不僅作用于免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng),還廣泛作用于神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng),對細胞間相互作用、細胞的增殖分化和效應功能有重要的調(diào)節(jié)作用。
  重組人GDF3重組要求:
  1. 真實性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實性。
  2. 純度:應用兩種方法分析產(chǎn)品純度。
  3. 生物活性:進行相應的體外或體內(nèi)活性檢測。
  4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,電泳檢測;必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。
  5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。
  6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
  重組人GDF3影響表達的因素和解決方法:
  影響蛋白原核表達的因素很多,如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過強,就難以表達;稀有密碼子過多或多個稀有密碼子連在一起也難以表達。首先要分析你的蛋白序列和二級結(jié)構(gòu),看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達全長蛋白,像這種情況難度就比較大,可以進行密碼子的改造,或者更換載體,或者更換宿主菌。看試驗的目的,如果不需要表達全長蛋白,如表達部分抗原性強的片段,可以簡單一點,表達部分片段即可。

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