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技術(shù)文章

慢病毒包裝實驗的制備程序

閱讀:1303          發(fā)布時間:2020-1-8

慢病毒包裝實驗方法構(gòu)建含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體(GeneCopoeia可提供各種慢病毒載體的ORF、啟動子、shRNA、miRNA前體和miRNA抑制劑克?。┘?xì)胞準(zhǔn)備:細(xì)胞傳代后,密度達(dá)到70%左右時進(jìn)行轉(zhuǎn)染;轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備:取兩個EP管,一個(A管)加入慢病毒載體的表達(dá)質(zhì)粒、混合包裝質(zhì)粒和Opti-MEMI;另一個(B管)加入Opti-MEMI、轉(zhuǎn)染試劑,一邊輕柔渦旋A管,一邊往A管滴加B管的溶液。溶液混合后,室溫放置10-25分鐘,即完成轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染:將混合液逐滴加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中,混勻后孵育;收集病毒:轉(zhuǎn)染后48h、72h收集含慢病毒的上清;
慢病毒包裝及檢測工具:1.慢病毒包裝工具細(xì)胞293Ta(LT008);2.慢病毒包裝試劑盒(LT001);3.慢病毒濃縮試劑盒(LT007)

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