| 貨號： | CM-6003K |
| 供應(yīng)商： | 上海淳麥 |
| 數(shù)量： | 1000只 |
| 英文名： | TOP10F´ Chemically Competent Cell |
| 保質(zhì)期： | 1年 |
| 保存條件： | 零下80度 |
| 規(guī)格： | 20*100ul |
TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞
TOP10F` Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:
| TOP10F | 10×100μl |
| pUC19（control vector） | 10pg/μl 10μl |
TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞基因組:
F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1araD139 ?(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG
TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞背景說明：
CMbio TOP10F`菌株來源于TOP10菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉(zhuǎn)入TOP10菌株，即為TOP10F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達(dá)，從而可以用于一些表達(dá)毒性蛋白質(zhì)粒的擴(kuò)繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。CMbio TOP10F 可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選（如用于藍(lán)白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶基因的表達(dá)）實(shí)驗(yàn)，具有四環(huán)素抗性。CMbio High5TM系列TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>107cfu/μg。
TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞操作使用：
- CMbio TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。
- 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
- 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng) 抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱12-16h，時間過長會產(chǎn)生假陽性小菌落。
TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：
- CMbio 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時 間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
- 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作
- 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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