F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格:

F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1
gyrA96 relA1 phoA
F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：
CMbio-DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞。缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證 了插入 DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選-CMbio-
F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無需 42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min 內(nèi)完成轉(zhuǎn)化、涂板操作.

-CMbio-pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 1~5×10 8cfu/μg DNA。-CMbio-
F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞操作說明：
1、提前 15 分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到 37℃預(yù)熱。-CMbio-
2、F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物） 并用手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
3、用 200 μl 槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA 混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng) 37℃預(yù)熱的 LB 培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。
4、將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 15h。

快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法  (25min,可提高轉(zhuǎn)化效率)：

一、F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
二、42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘 (晃動會降低轉(zhuǎn)化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB， 37℃，200 rpm  復(fù)蘇 10 分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。-CMbio-
三、將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 15h。
F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：
（一）F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作，對于>7 kb 質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步 驟操作：F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，插入冰中，5 分鐘后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底輕輕混勻，冰中 靜置 20 分鐘。42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰中靜置 2 分鐘。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 復(fù)蘇 30 分鐘，涂 板。-CMbio-
（二）感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存 放會降低轉(zhuǎn)化效率，混入目的 DNA 時應(yīng)輕柔操作。-CMbio-
（三）F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板， 轉(zhuǎn)化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可按熱激 轉(zhuǎn)化操作，增加孵育步驟。
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