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總皂苷的測定方法（分光光度法）
閱讀：5461 發(fā)布時間：2019-1-16
本方法適用于功能性食品中總皂苷的測定
本方法人參皂苷Re的低檢出量為2μg/mL
一、方法提要
樣品中總皂苷經(jīng)提取、PT—大孔吸附樹脂柱預(yù)分離后，在酸性條件下，香草醛與人參皂苷生成有色化合物，以人參皂苷Re為對照品，于560nm處比色測定。
二、儀器
1.722分光光度計。
2.PT—大孔吸附樹脂柱(河北省津楊濾材廠)。
3.超聲波振蕩器。
三、試劑
1.甲醇(分析純)
2.乙醇(分析純)
3.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)
4.5%香草醛溶液：稱取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL
5.高氯酸(分析純)
6.冰乙酸(分析純)
7.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人參皂苷Re2.0mg
8.重蒸水
四、測定步驟
1.樣品處理：
(1)固體樣品
稱取1.0g左右樣品于100mL燒杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超聲波振蕩30min，再定容至50mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0mL揮干后以水溶解殘渣，進行柱分離
(2)液體樣品
含乙醇的酒類樣品：準(zhǔn)確吸取1.0mL樣品放于蒸發(fā)皿中，蒸干，用水溶解殘渣，用此液進行柱層析；非乙醇類液體樣品：準(zhǔn)確吸取1.0mL樣品(如濃度高或顏色深，需稀釋一定體積后再取1.0mL)直接進行柱分離
2.柱層析
以PT—大孔吸附樹脂柱進行層析分離，準(zhǔn)確吸取上述已處理好的樣品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，再用20mL85%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，以此作顯色用
3顯色
在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL 5%香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動蒸發(fā)皿，使殘渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混勻后移入l0mL比色管中，塞緊蓋子于60℃以下水浴上加溫15min取出，冷卻后準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后以1.0cm比色皿、于560nm處與人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)管同時比色
4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.0mg/mL)0、20、40、60、80、100μL(相當(dāng)于人參皂苷Re0、40、80、120、160、200μg)，于10mL比色管中，用氮氣吹干，同4.(3)顯色步驟測定吸光度。并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
人參總皂苷濃度為20～200μg/mL之間與吸光度值呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)0.999
五、結(jié)果計算
式中 X——樣品中總皂苷(以人參皂苷Re計)(g
m——試樣質(zhì)量或試液體積(g或mL)
V1——樣品提取液總體積(mL)
V2——樣品提取液測定用體積(mL)
m1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測液中人參皂苷Re量(μg)
六、注釋
1.人參系五加科植物是人參Panax ginseng C A Meyer的根，含有多種人參皂苷(ginsenoside)，多數(shù)為達瑪烷型皂苷，如人參皂苷Ral、Ra2、Rbl、Rb2、Rb3、Re、Rd等；少數(shù)為齊墩果酸型(C型)皂苷，如人參皂苷Re。由于苷元不同，達瑪烷型皂苷又分為：20S—原人參二醇類皂苷(A型)和20S—原人參三醇類皂苷(B型)。其中，A型和B型皂苷酸水解后，分別得到人參二醇(Panaxadial)和人參三醇(panaxatriol)。除人參外，五加科的西洋參、三七、刺人參、刺五加和葫蘆科的絞股藍中亦含有與人參皂苷類似的化合物。當(dāng)保健食品原料配方中含有上述多種原料時，即以本法"總皂苷(以人參皂苷Re計)"報告檢測結(jié)果。
2.對于人參、西洋參、絞股藍純品或以其為主要原料加工的保健食品，按《中華人民共和國藥典》2000年版一部第99頁，以薄層色譜法進行鑒定試驗，將受試品色譜與對照藥材色譜及對照品色譜進行比較確定其主要原料后，人參、西洋參制品仍以人參皂苷Re為對照品進行檢測，而絞股藍制品以絞股藍總皂苷(中國藥品生物制品檢定所)為對照品進行檢測，分別以"人參總皂苷"、"西洋參總皂苷"、"絞股藍總皂苷"報告檢測結(jié)果。
3.回收率：90%～105%